【2017年整理】生物化学实验-2教案.docVIP

生物化学实验教案 PAGE PAGE 1 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 [时间安排]： 3 学时 [目的类型]： 验证 [目的要求]：1、了解核酸的组分 2、掌握鉴定核酸组分的方法 [实验原理]： 酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。 RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 [仪器]： 研钵 锥形瓶 量筒 滴管 试管及试管架 烧杯 玻璃棒 表面皿 电子天平 离心机 恒温水浴锅 [重要实验步骤与教学设计]： 1. 将2.5g酵母悬浮于5ml 0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀,至少15分钟。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中，再用15ml0.04mol/L氢氧化钠溶液两次洗涤乳钵。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000r/min）15分钟，将上清液缓缓倾入15ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待RNA沉淀完全后，离心（3000r/min）3分钟。弃去清液，转移到表面皿中，沉淀在沸水浴上干燥，即为酵母RNA的粗制品。 2. 将沉淀转移至小烧杯中，加入3当量/升硫酸6ml，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。 嘌呤碱：取水解液1ml加入约1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，然后加入过量浓氨水，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。 核糖：取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液1ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 磷酸：取一支试管，加水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。 [实验注意事项] ： 苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反应。准微量DNA无影响，较多DNA存在有干扰，在试剂中加入适量的CuCl2可减少DNA的干扰。 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 [时间安排]： 3 学时 [目的类型]： 综合 [目的要求]：1、学习分光光度计的原理和使用方法。 2.学习测定淀粉酶活力的方法。 3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 [实验原理]： 种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 麦芽糖有还原性，能使3，5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水杨酸。后者可用分光光度计法测定。 休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌发后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。 本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。 [仪器] ：25ML刻度试管 吸管 研钵 离心管 分光光度计 离心机 [重要实验步骤与教学设计]： 1.种子发芽 小麦种子浸泡2.5小时后，放入25℃ 2.酶液提取 取发芽第三天的幼苗5株，放入予冷的乳钵内，加海砂少许，加1%氯化钠溶液10mL,用力磨碎。在室温下放置20分钟，搅拌几次。然后将提取液离心6分钟，3000r/min。将上清液倒入量筒，测定酶提取液的总体积。取1ml酶液，用缓冲液稀释10倍。 取干燥种子5粒作为对照，（提取步骤同上）。 3.酶活力测定 （1）取试管4支，编号。按下表要求加入各试剂（各试剂须在25℃ 将各管混匀，放在25℃ （2）取出各试管，放入沸水浴中加热5分钟。冷至室温，加3.5mL蒸馏水稀释一倍，混匀。 （3）用空白管作对照：在A500nm处测定各管的光吸收值，将读数填入下表。 4.计算 本实验规定：25℃ 根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，A标准=c标准 总活力单位=c酶×n酶×V酶 [实验注意事项] ： 酶液提取时，要使用-20℃ 酶的特性 [时间安排]： 3 学时 [目的类型]： 综合 [目的要求]： 加深对酶的性质的认识 内容： 本实验由温度对酶的活力的影响；pH对酶活力的影响；酶的激活剂及抑制剂三组实验组成。 (一)温度对酶活力的影响 [实验原理]： 酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37～40℃，植物酶的最适温度为50～60℃。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变，但在I100 低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。 [仪器] ： 试管及试管架 恒温水浴 冰浴 沸水浴 [重要实验步骤与教学设计]： 取3支试管，编号后按下表加入试剂： 摇匀后，将1号、3号两试管放人37℃恒温水浴中，2号试管放人冰水中。10分钟