九龍江水大肠菌群的测定.docVIP

九龙江水大肠菌群的测定 实验报告 系别：生物科学与技术系 班级：10食品（2）班 学号：101304232 姓名：吴秋妹 【摘要】利用多管发酵和革兰氏染色，通过观察实验过程中产酸产气的情况和镜检的结果，来识别Abstract】using the multiple tube fermentation and Gram staining, by observing the process of experiment middle acid gas production situation and the microscopic examination of the results, to identification of Escherichia coli positive bacteria. 【关键词】大肠杆菌、多管发酵法、革兰氏染色法、九龙江水 【Key words】Escherichia coli、multi-tube fermentation method、 Gram staining method、the water of Jiulong River 实验目的： 1.学习测定水源水大肠菌群数量的多管发酵法测定，了解大肠杆菌的数量在饮水中的重要性。 2.学习并初步掌握革兰氏染色法。 3.了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 前言： 水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。由于病原菌的数量少，检测过程复杂， 因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌 的数量来作为水被粪便污染的标志。如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水 已被粪便污染，并有可能含有病原菌。 大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革染氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经 37 ℃ 24~48h 培养能产酸产气。我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过 3 个。检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。 1．实验器材、试剂与实验方法：PH计、培养箱、电磁炉、显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、高压灭菌器、移液枪、电子分析天平 1.2试剂：乳糖、蛋白胨、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、去离子水、伊红美蓝琼脂粉、结晶紫染色液、碘液、番红、酒精 1.3水样：1.4 实验方法 1.4.1配制培养基：1、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品药品放在中称量，称取各种药品倒入大烧杯用热水溶解。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2、加热溶解在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用 玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至。3、调pH 用pH试纸检测培养基的pH值，若pH偏酸，可滴加1mol/L NaH，边加边搅拌，并随时检测，直至达到pH范围。若偏碱则用１mol/l HCL进行调节。分装 加棉塞 三角瓶口塞上用普通棉花制作的棉塞。棉塞的 形状、大小和松紧度要适合，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利 通气的作用。要使棉塞总长3/5塞入试管口或瓶口内，以防止棉花脱落。试管口用。包扎 加塞后，将三角瓶的棉花外包双层报纸，以防止灭菌时冷 凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应先把装同类培养基的试管扎成捆后，再于塞外纸。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。灭菌将上述培养基于摄氏度湿热灭菌min。 、无菌检查 将灭菌的培养基放入37摄氏度温箱中培养24-48h，无菌生长即可使用。1、称药品按实际用量计算后，按配方称取药品药品放在中称量，称取各药品倒入大烧杯用热水溶解。 2、加热溶解在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用 玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至。分装包扎灭菌及无菌检查同上（一）1.4.2 制备稀释液：1、：10-15厘米的深处打开瓶塞，等水满后盖上盖子后从水中取出。运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出后又流回瓶中，从而增加污染。 2、水样的稀释： 将灭菌的三根试管各装4.5ml的无菌水标上1、2、3的记号。充分振荡水样，从中吸取0.5ml于1号试管中，充分振荡即得1：1