【2017年整理】实验五 细菌生理生化反应.docxVIP

细菌鉴定中常用的生理生化反应 生05 边晔 2010030026 周四班 同组成员：徐竞 实验时间 2012年11月15日 实验目的 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法； 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性； 了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义； 学习各种接种技术。 实验原理 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质分解能力也不一样，因而代谢的产物存在差别。 细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。（具体原理略） 用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 实验器材 仪器和用具 恒温培养箱。试管：每个试验4根试管(3根接种，1根对照)。 接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔、打火机、杜氏小管。 微生物 大肠杆菌（Escherichia coli）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、产气杆菌（Enterobacter aerogenes）和未知菌S3的各自悬液。 试剂 甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂。 上次配制的试管培养基（葡萄糖/乳糖发酵培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，胰蛋白胨水培养基，硫化氢试验培养基，明胶液化培养基，柠檬酸盐培养基），淀粉培养基平板。 实验步骤 培养基配制（上次实验制备） 葡萄糖/乳糖发酵培养基（用于糖发酵实验） 胰蛋白胨 5g NaCl 2.5g 水 500ml 制法： 将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。 加葡萄糖/乳糖5g，溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。 分装于60支试管内，每管5ml。 每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。 葡萄糖蛋白胨水培养基（用于甲基红和VP实验） 蛋白胨 2.5g 葡萄糖 2.5g 磷酸氢二钾 2.5g 蒸馏水 500ml 制法： 将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2。 分装于120支试管中，每管5ml。0.06MPa灭菌30min。 胰蛋白胨水培养基（用于吲哚实验） 胰蛋白胨 5g NaCl 2.5g 水 500ml 制法： 将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。 分装于60支试管中，每管5m1。0.06MPa灭菌30min。 柠檬酸盐培养基（用于柠檬酸盐利用实验） 氯化钠 2.5g 硫酸镁 0.1g 磷酸氢二铵 0.5g 磷酸二氢钾 0.5g 柠檬酸钠 1g 琼脂 10g 1%溴麝香草酚蓝酒精液 5ml 蒸馏水 500ml 制法： 将上述各成分(溴麝香草酚蓝除外)加热溶解，矫正至pH6.8。 加入溴麝香草酚蓝混匀，分装60支试管，每管约5ml。 高压灭菌0.1MPa 20min后制成斜面。 明胶培养基（用于明胶液化实验） 牛肉膏 2.5g 蛋白胨 5g NaCl 2.5g 明胶 60g 水 500ml 制法： 将上述成分溶化，调pH7.2-7.4。 加入明胶，分装到60支试管，每支5ml。 0.06MPa ，30min灭菌。 硫化氢实验培养基（用于硫化氢实验） 蛋白胨 10g NaCl 2.5g 柠檬酸铁铵 0.25g 硫代硫酸钠 0.25g 琼脂 4g 水 500ml 制法： 调pH至7.2后，用水将琼脂加热溶解。 分装到60支试管，0.1MPa 20min灭菌后备用。 淀粉培养基（用于淀粉水解实验） 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 可溶性淀粉 2g NaCl 5g 琼脂 20g 水 1000ml 制法： 取少量水将淀粉调成糊状，再加入到已溶化好的培养基中，定容到1000ml。 调pH至7.2，分装于三角瓶，115℃、25min灭菌后冷却到60℃左右，无菌操作倒入无菌培养皿中制作平板培养基。 培养基的标记。 用记号笔在试管上标明培养基的名称，所接种的菌名，和实验组号； 接种 取不同培养基，按照实验要求从相应细菌悬液中取菌接种。 如下表所示。 图1 淀粉水解实验接菌图 表1 各培养基接种细菌 编号 实验名称 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌 产气杆菌 变形杆菌 未知菌S3 空白对照 1 葡萄糖发酵 ○ X X ○ ○ - 2 乳糖发酵 ○ X X ○ ○ - 3 甲基红 ○ X ○ X ○ - 4 伏普 ○ X ○ X ○ - 5 吲哚 ○ X ○ X ○