第三章 酶和细胞的固定化技术及其应用[精选].pptVIP

第三章 酶和细胞的固定化  技术及其应用 酶的概述 具有高效和专一催化功能的生物大分子，包括蛋白质和核酸两类。 酶调控着新陈代谢，是生命活动的基础。 反应条件温和 催化效率特别高 具有高度的专一性（绝对专一性、相对专一性、立体异构专一性） 酶作为一种生物催化剂，因其催化作用具有高度专一性、催化条件温和、无污染等特点，广泛应用于食品加工、医药和精细化工等行业。 但在使用过程中，人们也注意到酶的一些不足之处，如酶稳定性差、不能重复使用，并且反应后混入产品，纯化困难，使其难以在工业中更为广泛的应用。 为适应工业化生产的需要，人们模仿人体酶的作用方式，通过固定化技术对酶加以固定改造，来克服游离酶在使用过程中的一些缺陷。 酶的固定化 固定化酶是一种在空间运动上受到完全约束或局部约束且仍具有活性的酶。 近代工业化利用始于1969年固定化氨基酰化酶的应用。 利用固定化技术，解决了酶应用过程中的很多问题，为酶的应用开辟了新的前景。如可使所使用的酶、细胞能反复使用，使产物分离提取容易，并在生产工艺上可以实现连续化和自动化，故在20世纪70年代后得到迅速发展 。 其新的功能和新的应用正在迅速不断地扩展，是一项研究领域宽广、应用前景极为引人瞩目的新研究领域和新技术。 酶固定化的优点 同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次地使用 固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时也省去了热处理使酶失活的步骤。 可长期使用，并可预测衰变的速度。 提供了研究酶动力学的良好模型 可以提高生物反应器的选择范围 多数情况下，热稳定性、操作稳定性、储存稳定性及pH稳定性提高。 载体选择的原则 必须注意维持酶的构象，特别是活性中心的构象。酶的催化反应取决于酶本身蛋白质分子所特有的高级结构和活性中心，为了不损害酶的催化活性及专一性，酶在固定化状态下发挥催化作用时，既需要保证其高级结构，又要使构成活性中心的氨基酸残基不发生变化。这就要求酶与载体的结合部位不应当是酶的活性部位 由于酶蛋白的高级结构是凭借疏水键、氢键、盐键等较弱的键维持的，所以固定化时应采取尽可能温和的条件，避免那些可能导致酶蛋白高级结构破坏的条件，如高温、强酸、强碱、有机溶剂等处理。 酶与载体必须有一定的结合程度。酶的固定化既不影响酶的原有构象，又能使固定化酶能有效回收贮藏，利于反复使用。 固定化应有利于自动化、机械化操作。这要求用于固定化的载体必须有一定的机械强度，才能使之在制备过程中不易破坏或受损。 固定化酶应有最小的空间位阻。固定化应尽可能不妨碍酶与底物的接近，以提高催化效率和产物的量。 固定化酶应有最大的稳定性。在应用过程中，所选载体应不和底物、产物或反应液发生化学反应。 固定化酶的成本适中。工业生产必须要考虑到固定化成本，要求固定化酶应是廉价的，以利于工业使用。 常用固定化材料 新型固定化载体 纳米材料 磁性微球 等离子体材料 固定化方法 酶的固定化方法主要可分为五类：吸附法、包埋法、微囊法、共价键结合法和交联法等。吸附法和共价键结合法又可统称为载体结合法。 吸附法 吸附法是固定化方法中最简单的方法。 吸附法（adsorption）是通过载体表面和酶分子表面间的次级键相互作用而达到固定目的的方法。 酶与载体之间的亲和力是范德华力、疏水相互作用、离子键和氢键等。 吸附法又可分为物理吸附法和离子交换吸附法。 物理吸附法 物理吸附法(physical adsorption)是通过物理方法将酶直接吸附在水不溶性载体表面上而使酶固定化的方法。是制备固定化酶最早采用的方法，如α-淀粉酶、糖化酶、葡萄糖氧化酶等都曾采用过此法进行固定化。 物理吸附法常用的有机载体如纤维素、胶原、淀粉及面筋等；无机载体如活性炭、氧化铝、皂土、多孔玻璃、硅胶、二氧化钛、羟基磷灰石等。 离子交换吸附法 离子吸附法(ion adsorption)是将酶与含有离子交换基团的水不溶性载体以静电作用力相结合的固定化方法，即通过离子键使酶与载体相结合的固定化方法。此法固定的酶有葡萄糖异构酶、糖化酶、β-淀粉酶、纤维素酶等，在工业上用途较广。 如最早应用于工业化生产的氨基酰化酶，就是使用多糖类阴离子交换剂二乙基氨基乙基(DEAE)-葡聚糖凝胶固定化的。此外，DEAE-纤维素吸附的α-淀粉酶、蔗糖酶已作为商品固定化酶。 载体中酶蛋白的解吸脱落和非专一性吸附是比较严重的问题。 蛋白质在载体上的吸附和解吸与下列因素有关： pH、盐、酶浓度、温度、吸附速度、载体 共价结合法 共价键结合法(covalent binding）是将酶与聚合物载体以共价键结合的固定化方法。 酶蛋白N末端的α-氨基或赖氨酸残基的ε-氨基。 酶蛋白C末端的α-羧基、天门冬氨酸残基的β-羧基以及谷氨酸残基的γ