细胞培养技术问题整理.docVIP

一．名词解释 细胞培养：用酶消化法讲组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜的条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。 BSS溶液：平衡盐溶液，是人工合成培养基的基础成分，也常用来洗涤组织细胞，其主要成分是无机盐和葡萄糖，无机盐构成细胞的生命成分，维持细胞渗透压既其生存环境的稳定。葡萄糖供给细胞生存所需的能量。其中含少量酚红作为溶液酸碱度的指示剂。Hank’s液是常用的BSS液。 原代细胞培养：又称为初代细胞培养，从机体去的材料（细胞、组织或器官），在培养瓶内培养到第一次传代前。 传代培养或传代：细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。 组织块培养法：将组织块剪切成小块，直接送入培养瓶（皿）中，贴附一段时间后，细胞从组织块长出，最终形成单层细胞。 细胞系：原代细胞首次传代成功后即可成为细胞系 细胞株：通过筛选或克隆化，且有特殊性质或特异标记的细胞，这些特性在以后的培养中必须存在。这些特性包括：具有一定的标记染色体，对某种病毒的敏感性或抗性，以及具有特殊的抗原性等。 接触抑制：当一个细胞被其他细胞阻挡而无去处时就停止移动，接触区域的细胞膜皱褶样活动停止，这样保证了细胞不会重叠生长。 密度抑制：正常细胞生长汇合成单层时，细胞密度达到一定程度时，细胞即停止分裂的现象。 合成培养基（synthetic medium）是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的，其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究 mitotic index一个细胞群体中正在进行有丝分裂的细胞的百分数。在流动的液体培养基中培养非贴壁的悬浮细胞或小细胞团的细胞或组织的培养方法。细胞附着在微运载体上的培养也是一种悬浮培养。 优点：1.得到的是活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态结构、生命活动 2.可控制：选择对象、性质、调节条件。 3. 应用广， 学科多： 对象广。各种动物：低等动物--高等动物--人类一种动物：不 同年龄不同组织: 正常或异常（肿瘤） 4.较经济：花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象 5. 不易污染环境 缺点：1. 现人工无法完全模拟体内环境a. 失去彼邻关系b.失去神经体液的调节和细胞相互间的影响 2. 细胞趋向单一化 3.失去原有组织结构和细胞形态 4.分化减弱或不显要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。 5. 某些类型细胞还很难培养 6.大规模培养难度大 三、体外细胞培养的方式及特点？ 1、粘附型培养: 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。粘附是大多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式 2、悬浮型培养: 不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。来源: 来自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以.特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团 优点 : 生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态.缺点:观察不方便, 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞) 四、体外培养细胞的生长形态分类？ 主要2类： 上皮样、成纤维细胞样 、其它不定型 上皮样细胞型。 来源：来源于外胚层，内胚层细胞 如：皮肤及其衍生物, 消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核 易相连成片相靠—紧密相连— 成薄层—铺石状 成纤维细胞样细胞 。 培养中形态与成纤维细胞类似 来源：中胚层间充质组织起源的组织 如：真正的成纤维细胞 心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮细胞 形态：似体内成纤维细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核 五、解释下列常用术语：1).细胞系（cell line）： 2).细胞株： 3).原代培养： 4).n传代 培养： 5).转染（transfection）：6).lipofection： 1.细胞系（cell line）：原代培养物首次传代后，就可以称细胞系。不能或有限传代下去称有限细胞系。能连续传代的称连续细胞系。 2.细胞株：某类细胞经传代克隆并保持了该类细胞理化特征的细胞群体。 3.原代培养：直接取自生物体的组织细胞并进行培养。 4.传代培养：将细胞从一个培养物内分散到另一个培养物的过程。 5.转染（transfection）：将某个基因转移到培养细胞核内。 6.lipofection：常用细胞转