【2017年整理】仪器分析实验指导书.docVIP

实验四 反相高效液相色谱法测定水产品中土霉素和四环素残留量 实验目的 了解反相高效液相色谱的组成与分离原理； 了解高效液相色谱仪的基本操作； 掌握HPLC定性、定量方法； 了解水产品样品的前处理方法。 实验原理 在反相键合相色谱法中使用的是非极性键合固定相。它是将全多孔(或薄壳)微粒硅胶载体，经酸化处理后与含烷基(C8、C18)或苯基的硅烷化试剂反应，生成表面具有烷基或苯基的非极性固定相。 反相色谱的分离机制有多种，但多倾向于吸附色谱的作用机制。吸附色谱的作用机制认为，溶质在固定相上的保留是疏溶剂作用的结果(即所谓的疏溶剂理论)。根据疏溶剂理论，当溶质分子进入极性流动相时，即占据流动相中相应的空间而排挤一部分溶剂分子；当溶质分子被流动相推动与固定相接触时，溶质分子的非极性部分(或非极性分子)会将附着在非极性固定相上的溶剂膜挤开，直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合(吸附)形成缔合络合物，构成单分子吸附层，而极性部分暴露在溶剂中。这也就是说溶质分子和固定相之间的“结合”，是由于溶质和极性溶剂之间的斥力造成的，而不是非极性溶质和非极性固定相之间的微弱的非极性作用力的缘故。这种疏溶剂斥力作用中可逆的，当流动相极性减弱时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并将溶质分子释放而被洗脱下来。所以，流动相的极性越强，缔合作用就越强。显然，烷基键合固定相对每种溶质分子缔合作用和解缔作用之差，就决定