【2017年整理】硫化叶菌的假定蛋白质基因的PCR扩增.docVIP

硫化叶菌的假定蛋白质基因的PCR扩增 生122-1 刘昌陇 201270502101 【前言】 聚合酶链式反应简称PCR（Polymerase Chain Reaction） ，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法。PCR技术关键在于引物的设计，其目的就是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。 引物的设计需要注意： = 1 \* GB3 \* MERGEFORMAT ①引物长度在18-35bp，G+C含量在40%-60%之间，内部无发卡结构； = 2 \* GB3 \* MERGEFORMAT ②引物之间避免形成二聚体； = 3 \* GB3 \* MERGEFORMAT ③引物3’端和模板之间不应少于12个连续碱基相匹配； = 4 \* GB3 \* MERGEFORMAT ④在模板基因内部不应有和引物对中任一条引物相似的片段，有时需要在引物的3’端加上适当的酶切位点。 【目的】 从NCBI中获得Sulfolobus solfataricus (12389bp)硫化叶菌的16SrRNA的序列，其中80—709片段是编码保留待定蛋白的位置，使用软件Vector NTI Suite找出适宜的酶切位点，用特定的限制性酶切下，并电泳分离出该片段，选出合适的引物，实现PCR的扩增以及对该蛋白的分析。 【材料】 种类 名称 界 门 纲 目 科