201512181.1基因工程操作工具(上课用)要点.ppt

专题1 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 依据变异原理 基因重组 操作环境 生物体外 操作对象 基因（ DNA） 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 1．下列对基因工程的理解，正确的是(　　) ①可按照人们的意愿，定向改造生物遗传特性的工程 ②对基因进行人为删减或增添某些碱基 ③是体外进行的人为的基因重组 ④在实验室内，利用相关的酶和原料合成DNA ⑤主要技术为体外DNA重组技术和转基因技术 ⑥在DNA分子水平上进行操作 ⑦一旦成功，便可遗传 A．①②③④⑤⑥　　　　 B．①③④⑤⑥⑦ C．①③⑤⑥⑦ D．①②③⑤⑥⑦ C 基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明（1944） DNA双螺旋结构（1953）和中心法则的确立 遗传密码的破译（1964） 基因转移载体的发现（1967） 工具酶的发明（1970） DNA合成和测序技术的发明（1977） DNA体外重组的实现（1972） 重组DNA表达实验的成功（1973） 第一例转基因动物问世（1980） PCR技术的发明（1988） 基础理论 技术发明 基因工程产品 抗虫害的玉米 转基因鲑鱼 基因工程培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——基因进入受体细胞的载体 1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 分布：主要在原核生物中 种类 ：4000种 作用特点：特异性，即识别双链 DNA特定核苷酸序列 (6个,4、5、8个) 切点：特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 黏性末端 平末端 结果：形成两种末端 限制酶 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 1.原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的 限制酶在原核生物中的作用 2.迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解掉。生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵. 限制酶在原核生物中的作用 2.下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是(　　) ①一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 ②限制性核酸内切酶的活性受温度影响 ③限制性核酸内切酶能识别和切割RNA ④限制性核酸内切酶可从原核生物中提取 ⑤限制性核酸内切酶的操作对象是原核细胞 A．②③ B．③④ C．③⑤ D．①⑤ C DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，是把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子才能形成。 2.DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶——“分子缝合针” 连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。 这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。 E·coli连接酶只能连接黏性末端； T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端，但效率低 DNA聚合酶与DNA连接酶是同一种酶的不同名称吗? 相同 区别 DNA聚合酶 形成磷酸二脂键 只能将单个核