培养基的配制[精选].doc

实验五?微生物培养基的配制和灭菌 培养基是将微 生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。 培养基的种类： 根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类： 合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。 从培养基的物理状态来分： 液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。 固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。 半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。 微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。 一、目的要求 l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 二、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。 2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。 3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。 三、实验程序 （一）、培养基配制 l. 培养基配制的一般方法和步骤 （1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 （2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根据实验需要加入蒸馏水或自来水），用玻棒搅匀，加热溶解。 （3）调pH值（调pH也可以在加琼脂后再调），用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 表 6-1 琼脂和明胶的特性比较 （4）加琼脂溶化，在琼脂溶化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦，待完全溶化后，补足所失水分，一般数量少，时间短不必补水。 （5）分装：在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装，一般制斜面的装置为管高的1／5 特别注意不要使培养基粘污在管（瓶）口上以免浸湿棉塞，引起污染。 （6）包扎成捆、挂上标签。培养基分装好后，塞上棉塞，用防水纸包扎成捆挂上所配培养基名称的标签。 （7）灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的，应在下磅后取出，摆成斜面（见图6-1）。培养基经灭菌后，必须放在37℃恒温培养箱中培养 24h，如确无菌生长、方可使用。 图6-1 灭菌的试管培养基趁热摆成斜面 2．三种培养基的配方及具体配制方法 （1）. 牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）。 配方： 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 氯化钠3g 琼脂20g 自来水1 000mL pH7.2~ 7.4 灭菌l.05kg／cm2，25~30min ? 本实验将原配方配成各种浓缩液。各种浓度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨、30％氯化钠。以配制200mL培养基为例。 吸取30％牛肉膏2mL；50％蛋白胨2mL；30％氯化钠2mL；加入有刻度的搪瓷烧杯中，然后用自来水补足到200mL。用玻棒搅匀，在电炉上稍加热，调 pH至 7.4，加琼脂4g，加热熔化，用玻棒不断搅拌，至琼脂完全溶解为止，趁热在漏斗架上装试管，（见图6－2）。装带有棉塞的无菌试管，装置1／5的试管高度共12支，作斜面培养基、用铝壳试管帽的里装10mL。约试管高度的 1／2以上，用作分离时倒平板用。 图 6-2 分装培养基图 6-3 将培养基试管包扎成捆 分装完毕，以12支为一捆，用防水纸包扎成捆（图6-3），挂上标签，灭菌备用。 （2）. 马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基（用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基）。 配方： 去皮马铃薯（或鲜豆芽）200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 自来水1000mL 琼脂20g pH天然 ? 灭菌（含蔗糖）1.05kg/cm220min（含葡萄糖）0.1kg/cm2 30min ? 制备方法