器官移植及其免疫学检验1__培训课件.ppt

受精卵 DNA 表达人MHC “基因工程猪”的制备 体外自体胚胎定向诱导干细胞 胚胎工程 定义：具有自我复制的能力，在一定条件下能够分化成各种功能细胞。 分类： 包括：胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞） 生殖干细胞（embryonic germ cells, EG细胞） 具有全能性，能够分化成全身200多种细胞类 型， 进一步形成机体的任何组织和器官。 干细胞的基本概念 （1）全能干细胞（totipotent） 具有分化成多种细胞和组织的潜能，但却失去 了发育成完整个体的能力。 只能向一种或密切相关的两种类型的细胞分化。 （2）多能干细胞（pluripotent） （3）专能干细胞 　 患有糖尿病、进行性老年性痴呆、严重的心力衰竭或其他疾病，如果从他身上任何部位取下一些体细胞，通过核移植技术，将其体细胞的细胞核显微注射至去核的人卵细胞中，这种包含与病人完全相同的遗传物质的杂合卵细胞在体外培养发育成囊胚。 获得的囊胚中分离并扩增所谓的“人胚胎干细胞”(ES)，并体外诱导它们分化成胰岛细胞、神经元、心肌细胞等，将这些细胞移植至发病部位，则能够修复病人的组织或器官。 由于移植细胞与病人的基因完全相同，不会产生通常器官移植中的免疫排斥反应，修复的组织或器官将良好地履行职责，无需使用免疫抑制剂。 体外成熟卵子 建立胚胎干细胞系定向分化 各种干细胞(血细胞,骨细胞) 定向分化 克隆组织和器官 胚胎干细胞在体外具有无限增殖能力，可以发育为成体的各种组织细胞，因此，以胚胎干细胞作为“种子”细胞，将其在体外大量扩增并诱导分化为特定的组织细胞，如造血细胞、神经细胞、心肌细胞、肝细胞、胰岛素分泌细胞等，或直接发育为某种组织器官，可以广泛用于器官移植、组织工程、细胞替代和基因治疗。 返回章目录 THANK YOU FOR YOUR ATTENTION! 返回总目录 * * 如果受者体内有抗供者的抗体，说明受者的免疫系统已被供者致敏，有产生超急性排斥反应的可能 ，典型的方法是采用微量淋巴细胞毒试验。 试管法淋巴细胞毒试验操作步骤 测定管 阳性对照管 阴性对照管 受者血清（滴） 1 抗淋巴细胞血清（滴） 1 生理盐水（滴） 1 供者淋巴细胞（滴） 1 1 1 37℃ 30分钟 补体（滴） 5 5 5 37℃ 60分钟 2%台盼蓝（滴） 1 1 1 37℃ 10分钟 根据细胞死亡的百分比判断抗原抗体反应。曙红染色，在相差倒置显微镜下：活细胞镜下明亮，死细胞呈深暗色。应用荧光法，在荧光相差倒置显微镜下：活细胞镜下呈绿色，死细胞呈红色，目前国际上通用NIH方法计分。 结果判断 分数 死亡率（%） 定义 1 0～10 阴性 2 11～20 阴性 4 21～50 弱阳性 6 51～80 阳性 8 81～100 强阳性 0 无法判断 NIH计分标准 NIH计分示意图 将已知抗原的淋巴细胞与患者血清及补体孵育，判断患者HLA抗体的特异性。 特定细胞群反应抗体 （pannel reaction antibody,PRA） 原理 1.PRA阳性（10%）患者存活率明显低于10%。 2.首次移植的排斥，移植前输血及妊娠是造成致敏的主要原因。 3.HLA配型可克服致敏对肾移植存活率的影响。 4.由于HLA抗体的波动及输血等因素的影响，肾移植前的患者应定期检测其血清HLA抗体，一般每个月至少一次。 5.PRA10%患者，肾移植前一定要做交叉配型。 6.对于患者所具有的HLA抗体，应避免用相应抗原的供者器官。 7.通常移植后两周，患者血清可产生HLA抗体。 临床意义 移植前必须做HLA配型：血清学或DNA。 骨髓、肾移植对HLA配型较严格，心、肝等则不然。 经产妇、多次输血或移植失败者定期检查HLA抗体，每月一次。术后两周内每日监测。 器官骨髓移植检查项目的选择和应用 返回章目录 第四节 移植后的免疫监测 淋巴细胞亚群的百分比和功能测定 杀伤细胞活性测定 免疫分子水平测定 ①用单克隆抗体免疫荧光法或流式细胞仪测定Ｔ细胞及其亚群。 ②淋巴细胞转化试验测定Ｔ细胞的功能状态。 （一） 淋巴细胞亚群的百分比和功能测定 方法 在急性排斥的临床症状出现前1～5天，Ｔ细胞总数和CD4/CD8比值升高，一般认为当比值大于1.2时，预示急性排斥即将发生 意义 取供者淋巴细胞灭活后作为刺激细胞，分离患者淋巴细胞作反应细胞，将两种细胞混合直接做单向混合淋巴细胞培养，测得的结果实际是特异性淋巴细胞转