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miRNA qRT-PCR 引物 Bulge-Loop? miRNA qRT-PCR是锐博生物开发的成熟miRNA检测方法，不需荧光探针，只要SYBR Green即可，具有高灵敏度和特异性的优点。检测包括两个步骤：(1) 基于茎凸环结构引物的逆转录反应和(2) 实时荧光定量PCR。茎凸环结构的逆转录引物能与miRNA 3端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBR Green荧光染料共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。 产品目录 Bulge-Loop? miRNA qRT-PCR Primer 产品说明 订购 订购卡下载 miRNA是一类内源性非编码小RNA分子，长约20-23个核苷酸，预测有1/3的人类基因被miRNA调控，并且在物种间有非常高的同源性。研究表明，miRNA参与了几乎所有生命活动，包括细胞增殖和凋亡、器官生成、个体发育、造血、脂肪代谢等。目前，miRNA检测方法包括Biochip，qPCR， Northern Blots和micro-array。虽然qPCR是高灵敏性的方法之一，但是基于荧光探针的qPCR检测价格昂贵。 Bulge-LoopTM miRNA qRT-PCR是锐博生物开发的成熟miRNA检测方法，不需荧光探针，只要SYBR Green即可，具有高灵敏度和特异性的优点。检测包括两个步骤：(1) 基于茎凸环结构引物的逆转录反应和(2) 实时荧光定量PCR。茎凸环结构的逆转录引物能与miRNA 3端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBR Green荧光染料共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。 ? ◇??????? 特异性—hsa-let-7家族成员同源性极高（表1），彼此之间仅有单个或数个碱基的差异。传统检测方法对此无能为力，无法区分各个家族成员。但Bulge-LoopTM miRNA定量PCR方法采用了具有茎凸环结构的逆转录引物以及高特异的miRNA引物套装，保证了该方法的高度特异性，即使是高度同源的miRNA也能被准确检测。 表1：hsa-let-7家族：红色标示的是与hsa-let-7a不同的碱基 图1? Bulge-LoopTM miRNA定量检测has-let-7家族成员的融解曲线 针对hsa-let-7家族7个miRNA成员的Bulge-LoopTM miRNA定量PCR结果分析表明，hsa-let-7家族各成员的特异性引物对其他成员的干扰极小，绝大部分均可以区分开来（下表：以7个化学合成的miRNA为模板，归一化处理后的定量检测结果）。 ??????与一般的 miRNA检测方法不同，Bulge-LoopTM茎凸环结构引物可以在同一个试管进行1-45个逆转录反应，而不影响检测效果。Bulge-LoopTM miRNA实时定量PCR具有检测范围广、更快速，更灵敏，更省钱的优点；既能够准确定量低至0.1 pg总RNA中5个拷贝数的miRNA，也能够实现从1μg总RNA中精确定量检测高拷贝数的miRNA，即miRNA的拷贝数在7个数量级的动态变化范围内，均可实现准确定量的目的。 ◇ 高灵敏度—能够准确定量0.1pg总RNA中，最低量至5个拷贝的目标miRNA，具有一个7个数量级的动态变化范围。比传统的miRNA定量检测方法（如Northern blot和micro-array）具有更宽广的动态变化范围，无需担心因样品量少或者miRNA表达量低而无法精确检测。 图3 ?高灵敏度：低至5个拷贝的目标miRNA都能被检测出来 ?准确性—Bulge-LoopTM miRNA实时定量PCR可以验证微阵列表达谱数据的准确性。尽管只有少量的样品，该方法也能有效地检测出miRNA的表达量，而且重复性高。 ? 图2 以化学合成的has-let-7a为模板，进行梯度稀释后的定量检测 ?????????Bulge-LoopTM miRNA qPCR Primer Set是一个包含了miRNA特异的逆转录引物，以及PCR正反向引物的套装。具有茎凸环结构状的miRNA特异逆转录引物以及高度特异的正反向引物使得Bulge-LoopTM miRNA qPCR反应避免了miRNA前体的干扰，而反应的模板可以是总RNA或已纯化的miRNA分离物。通常U6 snRNA或5S rRNA作为miRNA检测的内参，适用于单个或多个样品不同miRNA的相对定量，而当您想知道一个细胞中miRNA的绝对数量时，可以使用化学合成的 miRNA 您现在的位置：产品服务 产品列表 miRNA inhibitor miRNA inhibitor是化学修饰的miRNA抑制物，通过特异地靶向