组织培养基本技术与基本知识..docVIP

组 织 培 养 基本技术与基本知识 2005.10.15 目 录 前言------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------5 基本技术---------------------------------------------------------------------------------------------------6 第一节 原代细胞单层静止培养的设备与器材准备--------------------------------------------------------------6 一、 设备与器材 二 、 器材的清洗 第二节 原代细胞单层旋转瓶培养的设备与器材准备------------------------------------------------------11 一 、 设备与器材 二 、 器材的清洗 第三节 组织培养用水的制备和各种溶液的配制----------------------------------------------------------12 水（双蒸水、三蒸水或去离子水） 汉克氏（Hanks）原液和汉克氏液 0.5%水解乳蛋白----汉克氏液（简称乳汉液）的配制 7.5%的碳酸氢钠（NaHCO3）配制 胰蛋白酶的配制 犊牛血清的制备 每毫升含1万单位双抗（青霉素与链霉素）的配制 每毫升5万单位制霉菌素的配制 营养液与维液的配制 第四节 器物与溶液的包装、灭菌和无菌操作-------------------------------------------------------------16 包装与灭菌 无菌操作 第五节 无菌检验---------------------------------------------------------------------------------------------------23 第六节 原代单层细胞的制备------------------------------------------------------------------------------------24 第七节 细胞计数和染色------------------------------------------------------------------------------------------26 细胞计数 细胞染色 第八节 培养细胞的观察---------------------------------------------------------------------------------------27 培养细胞的生长和繁殖 在单层细胞培养中细胞的形态观察 第九节 原代单层细胞培养中应注意的问题------------------------------------------------------------------29 应注意的问题 可能会出现的问题 在组织培养的细胞中病毒的接种与毒价的滴定（测定）--------------------------------------31 第一节 在组织培养的细胞上病毒的接种方法--------------------------------------------------------------32 一、用敏感细胞分离病毒 二、病毒在敏感细胞中的传代 接种后细胞病变（CPE）的观察与判定标准 第二节 在组织培养细胞中病毒毒价的测定----------------------------------------------------------------34 病毒毒价测定操作方法 半数细胞病变终点（TCID50）计算 基本知识-------------------------------------------------------------------------------------------------41 第一节 影响离体细胞生长繁殖的一些因素-------------------------------------------------