蛋白质的生工物合成.pptVIP

极端温度耐性 Hsp104, Hsp110 ClpB, ClpA, ClpX 100 kDa 类固醇受体和转录因子的维持 HspC（Hsp90、Grp94） HtpG, C62.5 90 kDa 蛋白折叠与去折叠提供耐热性，抑制翻译后向线粒体和叶绿体运输过程中的折叠 HspA（Hsp71, Hsp70, Hsp72, Grp78 (BiP), Hsx70） DnaK 70 kDa 线粒体和叶绿体蛋白的翻译后折叠 Hsp60 GroEL 60 kDa Hsp70辅因子 Hsp40 DnaJ 40 kDa HspB（哺乳动物有11成员，如Hsp27 ） GrpE 20-30 kDa Hsp10 GroES 10 kDa 功能 真核蛋白 原核蛋白 分子量 Hsp70 Hsp70多基因表达产物，组成型表达或诱导型表达包含两个结构域： 氨基端的ATPase域 羧基端的肽结合域 大肠杆菌 Hsp70 (DnaK)的肽结合域. Hsp60 监护蛋白或GroEL。由相同的60 kDa的14个亚基组成，并且由两个堆积的7-亚基环状结构聚集成双层饼状，具有肽链的多个结合位点。 ATP、GroES 多肽链在一个其它蛋白 质不可能进入的亲水环 境里进行单独折叠。 GroEL(hsp60)的结构 （1）多肽链的水解 （2）蛋白质的修饰 （3）蛋白质切割裂分和剪切 （4）亚基的聚合 2. 肽链合成后的加工 多肽链的起始氨基酸（及其后随序列）常被氨肽酶切除，水解可以发生在肽链合成过程中，也可以发生在蛋白从核糖体上解离后。fMet脱甲酰还是去fMet主要取决于第二个氨基酸。 （1）多肽链的水解 Arg、Asn、Asp、Glu、Ile或Lys：脱甲酰基为主 Ala、Gly、Pro、Thr或Val：常除去fMet 一些新合成多肽链需要在其它酶蛋白的作用下被水解切割去掉部分内部氨基酸序列后才能形成成熟的功能蛋白质或功能寡肽。 胰岛素的合成 去前导肽 去链内肽 糖基化、磷酸化、羟基化、二硫键形成和末端修饰 A.糖基化 一些蛋白质合成后需要糖基化变成糖蛋白或蛋白聚糖。 N-糖苷键的形成在内质网开始，和高尔基体内完成；O-糖苷键只在高尔基体进行，糖基化的蛋白释放在分泌小泡内。 质膜蛋白质和分泌性蛋白质具有糖链，这些附加糖基有重要生理功能，如红细胞膜上的ABO血型决定簇。 （2）蛋白质的修饰 1.3 终止 tRNA不能与终止密码子作用，而是靠特殊的蛋白质因子促成终止，这类蛋白质因子叫做释放因子。 原核生物有三种释放因子： RF1：识别UAA和UAG； RF2：识别UAA和UGA。 RF3：协助RF1和RF2发挥作用，依赖GTP。 释放因子作用于A位点，转肽酶变为水解酶将肽链从核糖体上解离，mRNA和tRNA也依次脱落，大小亚基也在IF3的作用下解离。 Several factors have similar shapes 多肽链合成终止后，解离的大小亚基又重新组装成核糖体，参加新肽链的合成，循环往复利用。多肽链在核糖体上的合成过程又称核糖体循环。 核糖体循环 多核糖体循环 在原核细胞内一条mRNA链上可结合多达几百个核糖体。每个核糖体合成一条多肽链，在一条mRNA链上同时合成多条相同的多肽链，大大提高了翻译的效率。 多顺反子分别独立起始，相邻顺反子间距超过核糖体跨度时，两亚基解离后重新组装。 2 .真核生物多肽链合成的过程　　 真核与原核蛋白合成的差异： a. 核糖体较大，80S（60S + 40S） ； b. mRNA 是单顺反子； c. 有较多的起始因子； d. mRNA 有5’帽子结构，起始识别需要起始因子eIF-4F的帮助； e. Met---tRNAMet不甲酰化； f. 形成小亚基复合物的顺序不同于原核的：先形成40S. Met-tRNAimet.GTP三元复合物，然后再加入mRNA。 2.1 起始 ① 核糖体分成40S和60S两个亚基。 ② 43S前起始复合物的形成（40S·tRNA·eIF2·GTP·。 ③ mRNA连接到前起始复合物上。 eIF4F 对5’ 帽子的准确识别及对GCC(A/G) CCAUGG的扫描 ④ 60S亚基与前起始复合物结合形成80S起始复合物。 2 .真核生物多肽链合成的过程　　 43S前起始复合物 48S起始复合物 80S起始复合物 2.2 延长（进位、转肽和移位） 与原核相似，区别在于延伸因子（eEF）体系不同。 eEF-1：至少αβγδ四个亚基， eEF-1α与GT