第十五章DNA复制范例.ppt

第十五章 DNA复制 第一部分 回顾 核酸的类别、分布和组成 核酸分为两大类. 脱氧核糖核酸（DNA） Deoxyribonucleic Acid 核糖核酸（RNA） Ribonucleic Acid。 脱氧核糖核酸（DNA） DNA分子含有生物物种的所有遗传信息，分子量一般都很大。 DNA为双链分子，其中大多数是链状结构大分子，也有少部分呈环状结构。 主要分布在细胞核中。 核糖核酸（RNA） RNA主要是负责DNA遗传信息的翻译和表达，分子量要比DNA小得多。RNA为单链分子。90％的RNA存在于细胞质中，其余存在于细胞核中。 RNA的类别 根据RNA的功能，可以分为mRNA、tRNA和rRNA三种。 mRNA (信使RNA) 约占总RNA的5%。 不同细胞的mRNA的链长和分子量差异很大。 它的功能是将DNA的遗传信息传递到蛋白质合成基地 ----- 核糖核蛋白体。 tRNA (转移RNA) 约占总RNA的10-15%。 它在蛋白质生物合成中起翻译氨基酸信息，并将相应的氨基酸转运到核糖核蛋白体的作用。 已知每一个氨基酸至少有一个相应的tRNA。 RNA分子的大小很相似，链长一般在73-78个核苷酸之间。 rRNA (核糖体RNA) 约占全部RNA的80%， 是核糖核蛋白体的主要组成部分。 rRNA 的功能与蛋白质生物合成相关。 主要存在于核糖体中。 中心法则 生物的遗传信息从 DNA传递给 mRNA的过程称为转录。根据 mRNA链上的遗传信息合成蛋 白质的过程，被称为翻译和 表达。1958年Crick将生物 遗传信息的这种传递方式称为中心法则。 第二部分 复制特点 第三部分 复制的酶系统 第四部分 复制过程 起始 方向 延伸 终止 原核与真核细胞复制的差别 501 DNA 损伤修复 174 四. 拓扑异构酶 　DNA快速解旋在复制叉处会形成超螺旋。拓扑异构酶可以通过切断DNA的一条链（拓扑异构酶I）或两条链（拓扑异构酶II），来释放超螺旋产生的扭转张力。 五. 解旋酶（helicase） 解旋酶是个需要ATP的酶　　解旋酶位于复制叉前，催化复制叉前面的双螺旋DNA解旋，形成单链DNA，便于DNA pol III和引发酶作用。解旋过程需要消耗ATP。E.coli中最重要的解旋酶是DnaB。 六.引发酶（primase） 引物合成酶 引物合成酶 这个酶沿着滞后链在有规则的间隔内合成短的RNA引物。然后通过DNA pol III在引物的3ˊ-OH端沿着5ˊ-3ˊ方向合成岗崎片段。RNA引物可以被DNA pol I除去，然后用互补的脱氧核苷酸填上。在复制起点处前导链合成开始时也需要引发酶。 复制过程 首先由引物合成酶由5’向3’方向合成10个核苷酸以内的RNA引物， 然后聚合酶III在引物3’-羟基上合成DNA， 再由聚合酶I切除引物，填补空白， 最后DNA连接酶将冈崎片段连接起来，形成完整DNA。 延伸的过程 二、复制的起点和单位 （一）复制子 基因组能独立进行复制的单位称为复制子。 原核生物是单复制子（1个起点） 真核生物是多复制子（多个起点） Multiple eukaryotic replicons Replication fork (二）复制起点 每个复制子有复制起点。 通过测定基因出现的频率可以确定起点位置。 起点有发动复制的序列，也有决定拷贝数的序列。起点的结构是很保守的。 DNA replication was found to begin at specific replication origins and proceed bidirectionally. Replication origin Replication forks 复制叉： Y字型结构，在复制叉处作为模板的双链DNA解旋，同时合成新的DNA链。 （三）复制终止点： 已发现E.coli的复制终止有关位点，其中含有23bp的保守序列，由tus蛋白与此位点结合参与复制的终止。 （四）复制方向 复制多数是双向、对称的，但也有例外。 通过放射自显影可以判断复制是双向还是单向。 Bidirectional replication (双向复制) of a circular bacterial replicon Origin Terminus Daughter DNA ? structure 单向复制有一些特殊方式： 滚环复制：噬菌体φX174DNA是环状单链分子，复制时先形成双链，再将正链切开，将5’连接在细胞膜上，从3’延长，滚动合成出新的正链。 2. 半不连续复制: Okazaki fragment 冈崎片段 [3H] Thymidine pulse-chase lab