动物细胞制药__培训课件.ppt

污染的防治 防止污染，预防是关键，预防措施应该贯穿整个细胞培养的始终。 器皿准备中的预防 用于细胞培养的器皿应该严格消毒，做到真正洁净 应该无菌的物品，要做到消毒严格、真正无菌 器皿的运输、贮存过程中，要严格操作，谨防污染 六、培养物的污染及防止 污染的防治 操作过程中的预防 超净台内放置的所有培养瓶瓶口不能与风向相逆，不允许用手触及器 皿的无菌部分，如瓶口和瓶塞内侧 在安装吸管冒、开启或封闭瓶口操作时要经过酒精灯烧灼，并在火焰 附近工作 吸取培养液、细胞悬液等液体时，应专管专用，防止污染扩大或造成 培养物的交叉污染 使用培养液前，不易较早开启瓶口；开瓶后的培养瓶应保持斜位，避 免直立；不再使用的培养液应立即封口 培养的细胞在处理之前不要过早的暴露空气中 操作时不要交谈、咳嗽，以防唾沫和呼出气流引发污染 操作完毕后应将工作台面整理好，并消毒擦拭工作面，关闭超净台 六、培养物的污染及防止 污染的防治 其他预防 及早冻存培养物； 重要的细胞株传代工作应有两个人独立进行 购入的未灭活血清应采取 56℃ 水浴灭活 30 分钟，使血清的补体和 支原体灭活 为了避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统的抗生素，或尽可能 不用抗生素 对新购入的细胞株应加强观察，防止外来的污染源； 定期消毒培养箱 六、培养物的污染及防止 污染的排除 培养的细胞一旦污染应及时处理，防止污染其他细胞。通常选高压灭菌 被污染的细胞，然后弃掉。 如果有价值的细胞被污染，并且污染程度较轻，可以通过及时排除污染 物，挽救细胞恢复正常。 六、培养物的污染及防止 污染的排除 常用的排除微生物污染的方法有以下几种： 抗生素排除法 各种抗生素性质不同，对微生物作用也不同，联合应用比单用效果 好，预防性应用比污染后应用好；如果发生微生物污染后再使用抗 生素，常难以根除。 有的抗生素对细菌仅有抑制作用，无杀灭效应。反复使用抗生素还 能使微生物产生耐药性，而且对细胞本身也有一定影响，因此有人 主张尽量不用抗生素处理， 一些有价值的细胞被污染后，仍需要用抗生素挽救，在这种情况下 可采用 5～10 倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24～ 48 小时，再换入常规的培养液，有时可以奏效。 六、培养物的污染及防止 污染的排除 加温除菌 根据支原体耐热性能差的特点。有人将受支原体污染的细胞置于 41℃ 中作用 5～10 小时（最长可以达 18 小时）杀灭支原体。 41℃ 对细胞本身应有较大影响，故在处理前，应先进行预试验， 确定最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的处理时间。 六、培养物的污染及防止 污染的排除 动物体内接种 受微生物污染的肿瘤细胞可以接种到同种动物皮下或腹腔，借动物 体内免疫系统消灭掉微生物，肿瘤细胞却能在体内生长，待一定时 间，从体内取出再进行培养繁殖。 六、培养物的污染及防止 污染的排除 与巨噬细胞共培养 在良好的体外培养条件下巨噬细胞可以存活 7～10 天，并可以分泌一 些细胞因子支持其他细胞的克隆生长。 与体内情况相似，巨噬细胞在体外条件下仍然可以吞噬微生物并将其 消化。利用96孔板将极少培养细胞与巨噬细胞共培养，可以在高度稀 释培养细胞、极大地降低微生物污染程度地同时，更有效地发挥巨噬 细胞清除污染地效能。 本方法与抗生素联