核移植技术与动物克隆__培训课件.ppt

供受体细胞所处的时期： 对于受体细胞而言，其所处的阶段对核移植后重构胚的发育至关重要；对于供体细胞而言，不同动物不同时期的胚胎具有不同的分化潜能，但是，如果核供体超过囊胚阶段，则会影响重组胚的发育，如果超过了囊胚后期，则更多的细胞会发生不可逆的分化。 2. 供体细胞核选择的因素： （1）细胞类型： KatoY等比较了牛同一个体卵母细胞和输卵管细胞及不同个体体 细胞 ：肝 细 胞、耳细胞、子 宫 细胞 、 表皮 细胞 、输 卵管 细胞及卵母 细 胞对克 隆效 果的影响 ， 结果认 为牛 卵 丘／颗 粒 细胞和输 卵管细胞最适用 于 牛 的核移植 。 （2）细胞传代次数： 细 胞 的传代 是 否 利 于克 隆个 体 方 面 的说 法 不 一 。 但是 大 多数 研究 者 使用 的 是原 代培 养 或短期 培 养 的 细 胞 ，认 为 这 类 细 胞 利 于 核 移 植 胚 的 发 育 。 3.受体细胞的因素： （1）盲吸去核法 通 常 ，盲 吸法 去 核 的时 间选 择 在 第 一 极 体 刚 排 出 时 ，因随 时 间延 长卵 细胞 核远 离第 一 极体 ，影 响 去核 效 率 。 此 外 ，不 同 动物 卵 母细 胞 的结 构 特点 不 同 ，其 盲吸法 的 去核效 率 也 不 同 。 （2）化学诱导去核法 与盲 吸法等建 立 在显微 操作 系统 基础 之上 的机 械 去核 法相 比 ，化学 去 核 法程 序 简 单 、机 械损 伤 小 、胞 质丢 失 少 、重 复性 好 、适 合 大 规模 卵 母 细胞 去 核 ，具 有很 乐 观 的应用 前景 。 卵母细胞要求完全去核，否则会形成多倍体影响发育。 （3）MPF的作用 MPF（促卵成熟因子）是通过卵成熟诱发物质的作用在卵细胞质内所产生的因子，可促使卵核胞破坏实现卵成熟过程。将正在成熟的卵细胞质注射到未成熟的卵时，可看到被注射的卵被诱发成熟。通过卵成熟诱发物质所产生的少量促卵成熟因子在卵内广泛增加，在到达一定浓度时，便引起卵母细胞成熟。卵细胞质中促卵成熟因子不具有特异性，所以可认为是普遍的细胞分裂开始的重要因子。 卵母细胞的活化程度将影响胚胎的进一步发育，只有完全活化才能发育。 4.重构胚激活因素、怀孕及其维持： 重 构胚 的激 活是 体 细 胞 克 隆技 术 的关 键 环 节 ，体 细胞 克 隆胚胎 的充 分激 活是 保证 胚胎 正常发 育 的先 决 条件 ，只有在 去核 卵母 细胞 充 分 激 活 的情 况 下 才 可 以 指导 移人 的 核 发 生 重 编 程 。 可以通过将重组胚放在结扎羊的输卵管中培育一段时间的方法，或者在体外将其与输卵管上皮细胞培养的的方法来促使其激活并发育。 注意移植重组胚的时间及维持其妊娠。 生物学意义： 1) 提高动物无性繁殖能力：扩大优良品种，挽救濒危物种。 2）促进对细胞核、细胞质与遗传关系的研究 3）探索控制肿瘤细胞和癌细胞核的活动机理：研究其基因调控，为治疗提供依据。 4）生物制药：活体药物工厂。 Cattle Goats Mice Pigs Gaur Cat Sheep 1996 1998 1998 1996 2001 2000 2001 克隆动物照片 Horse Deer Mules Rats Dog 2003 2003 2005 2003 2003 体 细 胞 克 隆 牛 理论问题 分化的体细胞克隆对遗传物质重编（细胞核内所有或大部分基因关闭，细胞重新恢复全能性的过程）的机理还不清楚； 克隆动物是否会记住供体细胞的年龄。 克隆动物的连续后代是否会累积突变基因。 在克隆过程中胞质线粒体所起的遗传作用等问题还没有解决。 2-3.克隆技术存在的问题 　实践问题 克隆动物的成功率还很低 生出的部分个体表现出生理或免疫缺限。 即使是正常发育的“多莉”，也被发现有早衰迹象 伦理道德问题！ 父亲？兄弟？ 母亲？ 归属感？ 人的唯一性问题。 犯罪问题 是一种退化的表现 我是谁？ 克隆人的伦理道德问题！！ 小结： 细胞核移植技术 概念 一般操作程序（细胞显微操作） 应用 动物克隆 概念 影响克隆效果因素 体细胞动物克隆步骤（多莉） 动物克隆现存的问题 * * * * * * 第五节核移植技术与克隆技术 主讲人：黄竹涛