酒曲中产酒酵母菌的筛选及发酵能力的测定..docVIP

酒曲中产酒酵母菌的筛选及发酵能力的测定 一、实验目的 1.掌握酵母菌的筛选方法 2.复习用显微镜观察菌形态的操作步骤 3.掌握酵母生产性能的测定：酵母发酵力的测定、酵母产酒精能力的测定、及其乃酒精的能力、 4.学习酒精出酒率的计算 二、实验原理 酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。菌落于细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形、椭圆、卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。 酒曲中含有细菌，霉菌，酵母菌等多种菌体，在菌体的分离提取中，通过对原菌的稀释，涂布，多次划线而使各种菌体得以分开，形成单菌落。通过观察菌落的形态以及在显微镜下对单菌体形态特征的观察确定酵母菌个体。 三、实验材料 1．实验器材 恒温培养箱，高压灭菌锅，三角瓶，电炉，石棉网，水浴锅，移液管，移液管架，容量瓶，冷凝管，蒸馏烧瓶，铁架台，软管，天平，酒精计，超净工作台，试管，培养皿，接种环，玻璃棒，涂布棒，漏斗，滤纸，玻璃珠，纱布，脱脂棉，酒精灯，白瓷缸，分析天平，量筒牛皮纸报纸琼脂黄豆芽 10g； 葡萄糖 5g；琼脂 g； 水 100ml；PH 自然。 5．发酵培养基 A 酵母抽提物0.75 g， B 蛋白胨0.75 g， C 硫酸铵0.25 g， D 磷酸二氢钾0.125 g， E 硫酸镁0.09 g， F 氯化钙0.07 g， G 葡萄糖25 g， H 蒸馏水250mL。 四、方法步骤 1、产酒酵母菌株的初选 （1）实验器材的准备与灭菌 1）清洗培养皿、锥形瓶数个，在干燥箱中干燥 2）检查并接通高压蒸汽灭菌锅，打开电源，在锅内加水，直至水位显示为高水位，设定温度为121℃，加热时间30min。 3）取出培养皿、锥形瓶，放置降温、用牛皮纸包裹放置在内锅层，加盖，并将盖上的螺栓以两两对称的方式同时旋转拧紧，防止漏气。 4）通电，在0.1Mpa，121℃，30min灭菌。 5）灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。 （2）培养基、无菌水的制备与灭菌 1）培养基的配方如下： 培养基成分 黄豆芽 100g  葡萄糖50g  琼脂 g  水 1000ml  PH 自然 2）配制方法 称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100ml水，小火煮沸30min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。 配制时，按每100ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化，补足失水。 分装、加塞、包扎。 高压蒸汽灭菌灭菌0min。3）倒平板：将灭菌好的培养基在无菌条件下倒入平板培养基，作为酵母菌的固体培养基备用。 （4）样品菌悬液制备 1、取样：用分析天平准确称取1g酒曲 2、制备悬液：取1g样品并用9ml无菌水溶解，振荡约20min，使样与水充分混匀，将细胞分散用一支无菌吸管从中吸取1ml悬液加入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5等一系列稀释菌液。 （5）平板涂布：用1mL移液管分别从各菌悬液试管中取菌悬液1mL于平板培养基上，用涂棒涂布均匀，每个稀释梯度做三个平板； （6）培养：恒温培养箱28℃培养1-2天； （7）观察细菌生长情况、结构状态和部落分布情况并记录，由于本次试验采用涂布平板法，无法准确知道酵母菌的含量。 （8）酵母形态的观察 用美蓝染色法取对数生长期的菌体进行制片，在放大10倍及40倍的显微镜下观察酵母形态，用测微尺测量酵母细胞的大小，并进行死活鉴别。 1-2天。 （10）斜面接种，将划线培养基取出，从中挑取单菌落在无菌条件下接种到斜面培养基上，然后恒温培养箱28℃培养1-2天。 2、酵母菌的扩培 （1）制备种子液培养基 1）培养基的配方如下： 培养基成分 黄豆芽 10g； 葡萄糖50g； 水100ml； PH自然。  2）配制方法 称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100ml水，小火煮沸30min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。 配制时，按每100ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，继续加热融化，补足失水。 分装、加塞、包扎  ④高压蒸汽灭菌灭菌0min。1天，即可使用。 3、酵母菌的发酵试验 （1）制备发酵培养基 发酵培养基：A 酵母抽提物