【2017年整理】鸡副嗜血杆菌的分离鉴定.docVIP

鸡副嗜血杆菌的分离与鉴定 摘要：鸡副嗜血杆菌可以引起鸡传染性鼻炎（IC），以鼻炎和鼻窦发炎、结膜炎、流鼻涕、打喷嚏、面部肿胀为主要症状。对养禽业带来重大的经济损失。本文根据细菌的分离培养、形态观察、血凝试验、易感动物回归试验及 PCR鉴定对副嗜血杆菌进行分离与鉴定。 关键词：鸡 副嗜血杆菌、分离、鉴定 自20世纪80年代以来，许多国家和地区均有爆发鸡副嗜血杆菌病的报道，且近期鸡副嗜血杆菌的发生率呈上升趋势，它是集约化养鸡场中重要的疫病之一。鸡副嗜血杆菌可以引起鸡传染性鼻炎（IC），以鼻炎和鼻窦发炎、结膜炎、流鼻涕、打喷嚏、面部肿胀为主要症状。本病多见于雏鸡群和产蛋鸡群，造成淘汰鸡数显著增加以及产蛋率显著下降，同时易引起流感或新城疫的并发，造成鸡场的重大经济损失。 副鸡嗜血杆菌 (Haemophilusparagallinamm，Hpg)是一种引起鸡急性上呼吸道疾病的致病菌。该呼吸道疾病俗称鸡传染性鼻炎 (Infectiouscoryza，IC)，临床上 以面部水肿、鼻窦炎、流泪为主要特征 ，可引起产蛋鸡的产蛋量下降 ，育成鸡的生长受阻、开产期推迟，肉鸡增重下降，给养禽业造成巨大的经济损失[1,2]。1920年，Beach首次对鸡传染性鼻炎进行了报道。1931年，DeBlieck成功分离了病原。自20世纪 80年代以来，在我国河北、北京、云南、山东 、湖北等省市先后爆发鸡传染性鼻炎。冯文达于 1987年首先在北京分离到 1株 细菌 ，证实了副鸡嗜血杆菌在我国的广泛存在[3]。按照 Page的分型方法，通过平板凝集试验可将副鸡嗜血杆菌分为 A、B和 C3个血清型[4]。乔朋波[5] 研究表 明不同血清型的副鸡嗜血杆菌在生长特性、致病性、药物敏感性和外膜蛋白结构等方面均存在差异。目前，在我国副鸡嗜血杆菌以 A型和 C型菌株 的流行为主，部分地区己经有 B型株的存在[6]。流行于我国的不 同血清型副鸡嗜血杆菌的先后有分离与鉴定的报道。研究表明，相同血清型间有交叉保护作用 ，不同血清型之间无交叉保护作用[7,8]。 鸡副嗜血杆菌的生物学特征 1.1　形态特征和培养特性 鸡副嗜血杆菌为革兰氏阴性菌，呈两极染色特性，无运动性，经24 h培养，生长成短杆状或球杆状，单在、成双或短链，长1～3 μm，宽0.4～0.8 μm。有毒力的菌株带有荚膜。本菌在含10%CO2条件下，血琼脂培养基上于37℃培养24～48 h，发育成青灰色、半透明、光滑、边缘整齐、直径约0.3 mm的针尖状菌落，不溶血，在斜射阳关下可见光滑型带彩虹光和粗糙型无彩虹光型的菌落形态。本菌为兼性厌氧菌，需要V因子，葡萄球菌在生长过程中产生V 因子。把鸡副嗜血杆菌与葡萄球菌接种在同一血液琼脂上，可在葡萄球菌菌落周围发现旺盛生长的鸡副嗜血杆菌，形似“卫星”状。本菌是唯一不能发酵海藻糖、半乳糖，有氧化氢酶阴性的嗜血杆菌。 1.2 抗原性和抵抗力 该菌分成A、B、C 3个血清型。A和C 型有夹膜，致病力较强；B 型无夹膜，致病力一般较弱。不同血清型之间无交叉保护力，同一血清型的不同亚型之间有部分交叉保护力。目前，我国分离鉴定的鸡副嗜血杆菌主要是A 型，其次为C 型，B型偶有发生。副嗜血杆菌在离开鸡体后抵抗力非常弱。培养基上的细菌在4℃时能存活2 周，在自然环境中数小时即死亡；45℃～55℃于2～10min死亡，在真空冷冻条件下可以保存10 年。一般消毒药均能将其杀死。 2.感染鸡副嗜血杆菌的流行病学、症状与病理变化 鸡是副嗜血杆菌的自然宿主，病原菌由鼻孔侵入，主要在鼻腔和眶下窦的黏膜上增殖，并随鼻液排出。各种周龄的鸡均易感，初产蛋鸡最敏感，病程一般为1～2周。传染源为病鸡和隐性带菌鸡，主要通过空气和尘埃，也可经污染的饲料、饮水用具、饲养人员的流动而传播。本病潜伏期很短，鼻腔接种病鸡分泌物24～48 h即发病。自然感染潜伏期为1～3 d。最初，病鸡无明显症状，仅见鼻中有稀薄水样鼻液，打喷嚏。几天后大批鸡感染，发病率可高达90%以上。成鸡鼻腔内流出浆液性或粘液状分泌物，堵塞鼻孔而出现呼吸困难和甩头。随后面部发炎，眼肿胀流泪，有脓性干酪样分泌物堆积。严重的整个头部肿大，失明。雏鸡发病常见张口呼吸，眼睑粘着，多因觅食和行动困难而饥饿、衰竭死亡，幸存雏鸡发育停滞或增重缓慢，淘汰率一般在30%以上。蛋鸡除表现成鸡症状外，开产期延迟，产蛋量下降。剖检可见鼻腔、眶下窦和眼结膜的急性卡他性炎症变化，面部及肉垂的皮下水肿。病程较长的可在气囊、腹腔和输卵管内见有乳黄色干酪样分泌物。产蛋鸡卵泡松软、血肿、坏死或萎缩，腹膜炎，公鸡睾丸萎缩。病理组织学检查，可见鼻腔、眶下窦和气管黏膜上皮细胞脱落、裂解和增生，黏膜固有层充血、水肿并伴有异染性细胞浸润。 3.材料与方法 3．1 主要试剂 含辅酶 I的