生物显口微技术实验.docVIP

备注 生物显微技术 学时：3学时，学分：，适用专业：一、实验目的与任务要求学生掌握制片的原理和主要方法，培养学生应用显微技术解决科研、生产问题的能力。提高学生动手、实践和运用现代科学仪器的能力等综合素质。生物制片的一般原理方法植物制片技术是植物显微技术课的一个重要组成部分，是研究植物细胞学、解剖学、胚胎学的必要技术基础。在有关植物形态建成、植物杂交育种、作物病虫害防治、药用植物的培育和鉴别以及林木材性鉴定等多方面的研究和教学工作中，都需要应用显微制片技术，由于各种作物器官的性质差异以及研究目的的不同，就需要不同的制片方法 三、植物制片方法可分为二大类： 1、切片法 （1）徒手切片法 方法简便，要求设备简单，但徒手切片技术要求熟练，方可切出符合要求的薄片。 （2）石蜡切片法 以石蜡作包埋剂。用旋转切片机将材料切成薄片（一般为812 μm，可以切成连续的蜡带），经一系列处理制成永存片。切片厚度比较好掌握。 （3）半薄切片法 方法步骤与石蜡制片相似，但包埋剂为塑料或环氧树脂，采用玻璃刀或钢刀，切片厚度为1－2 μm，不能切成连续的蜡带。 （4）冰冻切片法 将待切材料快速冷冻，或固定以后再冷冻，用冰冻切片机切片，用于做原位杂交、组织化学等。 （5）滑走切片机切片法 将材料夹持于夹持物中（如石蜡、火棉胶、胡萝卜等，木材软化后可直接切片），并固定于滑走切片机夹物台座上进行切片， （6）超薄切片法 用超薄切片机制作超薄切片，切片厚度为500? 左右，供电子显微镜观察用，技术要求更严格。2、非切片法 （1）离析法 酶等木材、药材研究（2）压片法 经化学药剂处理并用手工机械地使植物细胞分离如染色体压片法。 （3）整体封藏法 将完整细小的组织块进行处理，封藏为永存片，如叶表皮整体制片、团藻、水绵、黑根霉等装片。 （4）整体透明法 用透明剂将较小的材料整体透明，经透明以后可以在显微镜下观察其内部结构。 （5）胚囊酶法分离技术 对植物的胚珠进行酶解，将胚珠内部的完整胚囊分离出来，用于研究胚囊的发育、或者进一步分离出卵细胞。 按是否能长期保存来分，可分为二类： 1） 临时制片法：制片用于临时观察，不需要长期保存（如临时装片、徒手切片、冰冻切片等）。 永存片制片法：制片可以长期保存（如石蜡切片、半薄切片、超薄切片等）、教学基本要求 1要求重点掌握的技术： 石蜡制片技术(包括：取材、固定、脱水、包埋、切片、展片、烤片、染色、透明与封藏)； 2要求掌握的一般技术： (1) 植物其它片方法徒手切片法； (2) 非切片技术（压片法、涂片法整体透明法、酶解法等） (3) 摄影及照相机的使用方法；  备注 实验一 生物制片样品的选取与固定技术一、实验目的要求 了解生物制片样品的选材与固定技术，为石蜡切片做准备。 二、实验原理 1、选材与切割：根据不同制片目的和制片方法选取合适的材料；材料要求新鲜，无病虫害；先作徒手切片或剥离检查，决定适宜的材料立即固定处理；材料大小要适当，如根的直径在5 mm 以内的，可切取5-10 mm 长的小段，直径在5 mm 以上者可纵分割成1／2 或1／4，横切厚度约3-5 mm；叶的切割可切成2-5 mm，若叶较宽可切10 mm 的长条，叶面切取的部位，以研究者的目的灵活选取。切取材料必须使用新刀片，刀口和叶面垂直迅速切割下来；花、果的切割：花药和雌蕊切割，花芽和幼穗的切割，须剥去外部鳞片及叶鞘和其它部分，切去多余部分再放入固定液，有的花序则需去掉外方苞片，一般小的花不经切割可投入固定掖，大花果才进行分割处理。 2、杀生（杀死）：在制片过程中，将拟制片的材料（细胞或组织块）迅速杀死，使组织块尽量保持原生活时状态，这种处理通称杀生。杀生时常用一种或多种化学药品处理。一般以渗透力较强的药剂作杀生剂效果较好。 3、固定：在杀生处理的过程中，将器官、组织、细胞按原来的形态保存下来，并为后续制片保持固有形态，这样才达到固定的要求。杀生与固定关系密切，通常二者兼有作用。 4、保存：组织块经杀生固定后，能较长时间保存下来，经久保存下来的组织块，仍能制片，如酒精、醋酸，福尔马林液保存时间较长而铬酸类固定液，常须转换70 %酒精液后保存，才可较长时间保存。 三、实验材料与试剂 材料：南瓜茎或禾木植物的茎 试剂： 1、F.A.A 固定液（福尔马林－冰醋酸－酒精） （1）福尔马林（38 %甲醛） 5 m（2）冰醋酸 5 m （3）70 %酒精 90 m 2、F.P.A 固定液（福尔马林－丙酸－酒精）制片效果有时较F.A.A 好。 （1）福尔马林（38 %甲醛） 5 m （2）丙酸 5 m （3）70 %酒精 90 m 3、Canoys Fluid （卡