第二十章蛋白质和核酸解决方案.ppt

第二十章 蛋白质和核酸 * * 一、氨基酸: 分子中既含有氨基，又含有羧基的化合物统称为氨基酸。 组成肽和蛋白质的结构单元分子 —— a- amino Acid 残基 （一）构型 从自然界获得的氨基酸都是α-氨基酸； 除甘氨酸外，α-碳原子都具有手性。 自然界获得氨基酸基本都是L-型、S型（L-半胱氨酸除外） L-乳酸 L-丙氨酸 L-苏氨酸 D-苏阿糖 （三）氨基酸的性质 酸碱性 (acid-base properties) (1) 氨基酸既是酸又是碱 氨基酸在结晶状态或在接近中性的溶液中，是以两性离子 (dipolar ion) 的形式存在的。是一种内盐 (inner salt)。 物理性质： ① 高熔点固体； ② 易溶于水，不溶于非极性溶剂。 ?Amino acid act either as an acid (proton donor) ?Amino acid act either as an base (proton acceptor) (2) 氨基酸的等电点 如果在某一pH 值下，氨基酸所带正电荷的数目与负电荷的数目正好相等，即净电荷为零，则称该 pH 值为该氨基酸的等电点 (pI)。 等电点时，amino acids 几乎全部以两性离子 I 的形式存在, 并伴以极少量、严格相等的 II 和 III。处于等电点的氨基酸，其溶解度最小。 现在有四个氨基酸：苯丙氨酸pI=5.5、脯氨酸pI=6.3、门冬氨酸pI=2.8和赖氨酸pI=9.7，请问在以下pH条件下进行电泳，各氨基酸的主要存在形式是什么？在外电场作用下，移向阳极还是阴极？ 苯丙氨酸 脯氨酸 门冬氨酸 赖氨酸 （1）pH=7.0 （2）pH=6.0 （3）pH=5.0 （4）pH=2.0 正 阴极 正 阴极 负 阳极 正 阴极 负 阳极 负 阳极 负 阳极 正 阴极 正 阴极 正 阴极 正 阴极 正 阴极 负 阳极 正 阴极 负 阳极 正 阴极 (3) 氨基酸的化学性质 （甲）羧基的反应 α-氨基酸具有羧酸化学性质，可以与碱、五氯化磷、氨、醇、氢化铝锂等反应。 活化羧基 保护羧基 （乙）、氨基的反应 α-氨基酸还具有典型的伯胺化学性质；如能与酸、亚硝酸、烃基化试剂、酰基化试剂、甲醛、过氧化氢等反应。 脯氨酸除外 （丙）、茚三酮反应 （鉴别反应） 蓝或紫红色的有色物质脯氨酸除外 (4) 氨基酸的制备方法 1）由醛酮制备—— 最早发现的合成方法 反应机理如下： 2）α-卤代酸的氨化 采用大大过量的氨 邻位羧基的影响，降低了α-氨基的亲核性能 因此，反应可以得到很好地控制 3）Gabriel-丙二酸酯合成法 用这种方法可以得到其他合成方法难以得到的α-氨基酸，如甲硫氨酸（蛋氨酸） 二、多肽 Peptides —— 由两个以上氨基酸通过肽键（酰胺键）连接起来的化合物。 二肽（dipeptide）：2 amino acid residues 寡肽（oligopeptide ）：2~10 amino acid residues 多肽（polypeptide ）： 10 amino acid residues 蛋白质（protein ）：molecular weight 10 Kd’ （一）肽和肽键 肽的结构特征：Peptide bond —— 一分子氨基酸的羧基与另一分子氨基酸的氨基失去一分子水而形成的酰胺键。 肽链的氨基酸顺序与命名 （二）多肽的结构测定和端基分析 Determining the structure of peptides 1. 氨基酸组分分析 2. 氨基酸顺序分析 —— The number and kinds of amino acids —— 6 N HCl, heating at 100oC for 24 h —— automated amino acid analyzer —— 从N-端测序：Edman降解法：可用于自动测序 适用于50肽 —— C-端氨基酸残基的分析：羧肽酶 羧肽酶是肽链外切酶（exopeptidase），即它专门催化水解肽链末端（即C-端）的肽键。 羧肽酶A水解断裂那些不是Arg和Lys的C-端氨基酸 羧肽酶B则仅水解断裂C-端为Arg或Lys的氨基酸 —— 多肽链的选择性水解：酶法和化学法 化学法——溴化氰水解法，选择性切割甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 —— 采用重叠法得出整个肽链的氨基酸顺序 ——