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第一章 基因工程 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 技术，赋予生物以新的 特性，创造出更符合人们需要的新的 。基因工程是在 水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 一、基因工程的基础理论： 1、DNA是遗传物质的证明。1944—艾弗里肺炎双球菌的转化实验，不仅证明了生物的遗传物质是DNA，还证明了 。 2、DNA双螺旋结构和中心法则的建立。 1953—沃森、克里克建立了DNA双螺旋结构模型；1958—梅塞尔松、斯塔尔证明DNA的 复制。随后不久确立的 ，简明了 流动方向。 3、遗传密码的破译。 1963—尼伦伯格和马太破译了遗传密码；1966—霍拉纳证明了 的存在。自然界的所有生物共用一套遗传密码。为基因的 提供了理论依据。 二、基因工程的技术支撑： 1、基因转移载体的发现。1967—罗思和赫林斯基发现质粒有自我复制能力，并且可以在细菌细胞间 。为基因转移找到了载体。 2、工具酶的发现。1970—阿尔伯等发现了第一个限制酶；后来相继发现了多种限制酶和连接酶、逆转录酶。为DNA的 创造了条件。 3、DNA合成和测序技术的发明。1965—桑格发明了氨基酸序列分析技术；1977—科学家发明了DNA序列分析的方法。为基因 的绘制提供了可能。 DNA合成仪的问世，为 的获得提供了方便。 4、DNA体外重组的实现。 5、重组DNA表达实验的成功。1973—博耶和科恩用质粒pSC101与非洲爪蟾核糖体蛋白基因重组的DNA转入大肠杆菌DNA中转录出相应的mRNA。从而证明：质粒可以作为基因工程的载体，重组DNA还可以进入受体细胞，外源基因可以在原核细胞中成功表达，实现物种间的 。 6、第一例转基因动物—转基因小鼠问世。 7、PCR技术发明，使基因工程技术得到进一步发展和完善。 （DNA重组和转基因；遗传；生物类型和生物产品；DNA分子；DNA可以从一种生物转移到另一种生物体；半保留；中心法则；遗传信息；遗传密码；分离和合成；转移；切割、连接和功能基因的获得；序列图；引物、探针和小分子量DNA基因；基因交流；） 1、1 DNA重组技术的基本操作工具 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从 生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的 序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 末端和 末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合 键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于 ，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于 ，能缝合两种末端，但连接末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的 末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA 的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，便于外源 片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的 。 （2）最常用的载体是 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 质粒载体的处理：真正被用作载体的质粒，都必须在天然质粒的基础上进行 （3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒 （原核；核苷酸；磷酸二酯键；黏性；平；磷酸二酯；大肠杆菌；T4噬菌体；平；黏性；片段；DNA；鉴定和选择；；质粒；人工改造） 1、2 基因工程的基本操作程序 包括四步：目的基因的获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测和表达。 第一步、目的基因的获取： 目的基因是指： 编码 的结构