AdenoX 表达系统----最有效的腺病毒系统之一 --生物通.docVIP

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2017-01-23 发布于河南
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Adeno-X 表达系统----最有效的腺病毒系统之一 --生物通 Adeno-X 表达系统----最有效的腺病毒系统之一 --生物通 ·关于我们 ·联系方式 ·刊登广告生物通首页今日动态生物通商城人才市场核心刊物特价专栏 BBS交流技术与投资新技术专栏会展中心技术期刊技术讲座仪器龙虎榜您的位置：首页新技术专栏表达系统正文 Adeno-X 表达系统----最有效的腺病毒系统之一关键字：　　时间：2000-10-16　　　　来源：【字体：大中小】【打印本稿】【读后感言】【推荐】【关闭】在人细胞中快速、高水平地表达目的蛋白在2至3个星期内即可获得高效价的病毒无需噬斑纯化靶细胞可以是分裂或不分裂的细胞（dividing/or nondividing cell） CLONTECH的Adeno-X#8482;表达系统是一个特别高效的腺病毒表达系统，用于在人细胞中瞬时及高水平地表达目的蛋白质。由于Adeno-X#8482;病毒DNA中含有特别设计的克隆位点，你可以在2星期内获得高效价的腺病毒，其效率远高于其他腺病毒系统。高效表达目的蛋白质腺病毒介导的基因转移可以在人细胞中最高水平地表达目的蛋白质 (1)。因为含目的基因的重组腺病毒DNA是游离于细胞基因组外的 (不整合入宿主基因组)，所以目的蛋白质得到瞬时的高水平表达。更重要的是利用腺病毒表达系统可以将外源基因转到分裂及不分裂的细胞中表达。下表比较了腺病毒和逆转录病毒系统的特点。这两个表达系统是互补的，选择适当的表达系统，就可以把目的基因转入任何种类的人细胞。如果需要瞬时、高水平地表达蛋白质，那么腺病毒表达系统是最佳的选择. 腺病毒表达系统vs.逆转录病毒表达系统腺病毒表达系统逆转录病毒表达系统病毒DNA游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因病毒DNA整和于宿主基因组内，长时间、稳定表达外源基因感染分裂和不分裂细胞只感染有丝分裂细胞高水平表达中水平表达双载体单载体病毒滴度高达1012pfu/ml病毒滴度最高可达106pfu/ml 可插入高达8kb的外源片段可插入不超过6.5kb的外源片段会引起体内免疫反应不会引起体内免疫反应　构建重组腺病毒简单快捷构建重组腺病毒的两种传统方法是以同源重组为基础的。其一是用修饰的腺病毒DNA与穿梭载体在HEK 293细胞中进行同源重组；更为流行的方法采用了穿梭载体与腺病毒质粒转化一种特殊的菌株(BJ 5183)。然后从细菌中收集重组腺病毒，用其感染HEK 293细胞。虽然这些方法是可行的，但由于在HEK 293细胞中同源重组率偏低；或在转化BJ 5183之前克隆步骤过于复杂，使这两种方法效率偏低(下表)。同源重组体外连接法 Viral DNAPlasmid-based 制备穿梭载体和腺病毒载体7-14天7-14天2-3天目的基因从穿梭载体克隆到腺病毒载体--0-15天4天获得重组腺病毒14-21天17-22天4-7天噬斑纯化5-10天0-5天--