文献报告三氧化二砷作用机制技巧.pptVIP

三氧化二砷通过直接与结合PML决定PML-RARa癌蛋白的命运 * Arsenic Trioxide Controls the Fate of the PML-RARa Oncoprotein by Directly Binding PML Zhang, X.-W. et al. Science 328, 240-243 (2010). * 汇报内容 背景介绍 实验内容 结果与展望 背景介绍 三氧化二砷 (俗称砒霜)是一种应用比较广泛的传统中药，由于其在急性早有幼粒性细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)治疗中显示出明显的效果而受到全世界医药研究者的关注。2010年陈竺、陈赛娟院士领导的课题组应用化学蛋白质组学技术, 成功解析其治疗APL的分子机制，该结果发表在Science上，受到业界关注。 APL是一种特殊类型的急性髓细胞性白血病，具有特征性的PML-RAR 癌蛋白，曾经被认为是最为凶险的白血病之一。上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所的研究者通过长期实验最终使APL成为第一种基本可以被治愈的急性髓细胞性白血病。 该实验首次揭示了癌蛋白PML-RAR 是砷剂治疗APL 的直接药物靶点。该实验组发现三氧化二砷直接与癌蛋白PML 端的“锌指”结构中的半胱氨酸结合, 诱导蛋白质发生构象变化和多聚化, 继而发生SUMO 化、泛素化修饰而被蛋白酶体降解,最终导致白血病细胞走向分化和凋亡, 使APL 成为人类急性白血病分子靶向治疗取得临床治愈的成功范例。 主要内容 三氧化二砷对于翻译后修饰降解的影响 实验内容 . 研究了三氧化二砷与蛋白质相互作用 三氧化二砷与PML以及PML-RARa相互作用研究 EGFP-PML和EGFP-PML-RARa共定位研究PML与ReAsH相互作用 体内试验：三氧化二砷结合在PML-R以及诱导该蛋白质结构域构象变化 凝胶过滤显示砷结合有道德PMR-R的产生的寡聚体，主要是八聚体 As2O3诱导过后对PML结构的影响 * 结果与展望 结果：砷直接结合于引起APL的原癌蛋白PML-RARα上，导致PML和PML-RARα的泛素化和降解增加，从而达到治愈APL的目的。 展望：确定PML是As2O3的直接靶点，为将来优化和使用这种古老的中药治疗白血病开启了新的方向。 * * 1985年，上海血研所王振义教授在国际上率先应用全反式维甲酸（ATRA）治疗APL患者取得成功，上世纪90年代，在哈尔滨医科大学张庭栋教授等应用传统中药三氧化二砷治疗APL患者取得疗效。 * 这一成果丰富了APL 靶向治疗的理论, 对于推动其他类型白血病和实体瘤的分子靶向治疗研究具有十分重要的指导意义。 * A/BWestern blotting说明了As2O3诱导在人类APL细胞系NB4中PML以及PML-RARa蛋白的降解。1 μM As2O3就可以达到很好的效果。 * C图说明了随时间变化药物对各种蛋白质降解的效果。D说明了与对照组相比PML发生过表达。 * 为了研究砷是否直接与细胞中PML和PML-RARa直接结合，应用两种有机砷作为探针，亲和素琼脂糖测定显示证明了Biotin-AS与PML和PML-RARa结合，这种结合可以被As2O3或非标记的PAPAO拮抗图A。 * 为进一步研究砷的结合，通过瞬时过表达与EGFP融合的蛋白质，ReAsH一向对特异性的方式与EGFP-PML和EGFP-PML-RARa共定位，阐明了PML中那个区域与ReAsH相互作用。 * * * * * 1985年，上海血研所王振义教授在国际上率先应用全反式维甲酸（ATRA）治疗APL患者取得成功，上世纪90年代，在哈尔滨医科大学张庭栋教授等应用传统中药三氧化二砷治疗APL患者取得疗效。 * 这一成果丰富了APL 靶向治疗的理论, 对于推动其他类型白血病和实体瘤的分子靶向治疗研究具有十分重要的指导意义。 * A/BWestern blotting说明了As2O3诱导在人类APL细胞系NB4中PML以及PML-RARa蛋白的降解。1 μM As2O3就可以达到很好的效果。 * C图说明了随时间变化药物对各种蛋白质降解的效果。D说明了与对照组相比PML发生过表达。 * 为了研究砷是否直接与细胞中PML和PML-RARa直接结合，应用两种有机砷作为探针，亲和素琼脂糖测定显示证明了Biotin-AS与PML和PML-RARa结合，这种结合可以被As2O3或非标记的PAPAO拮抗图A。 * 为进一步研究砷的结合，通过瞬时过表达与EGFP融合的蛋白质，ReAsH一向对特异性的方式与EGFP-PML和EGFP-PML-RARa共定位，阐明了PML中那个区域与ReAsH相互作用。 * * *