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集训选修一 生物技术实践 微生物的培养和利用 一、微生物的实验室培养 1．培养基 (1) (2)分类 2．无菌技术 (1)关键：防止的入侵。 (2)不同对象的无菌操作方法[连一连] 3．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 →→→ → (2)纯化大肠杆菌的方法 ①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到的肉眼可见的，即可获得较纯的菌种。 ②纯化大肠杆菌的关键步骤：。 ③常用的微生物接种方法有两种 a．平板划线法：是通过在琼脂固体培养基表面的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 b．法：是将菌液进行一系列的，然后将的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (3)菌种的保存方法 ①对于频繁使用的菌种，可以采用的方法。 ②对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。深度思考 如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考 (1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？ (2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？ 消毒和灭菌的区别项目 概念 常用方法 应用的范围 消毒 一般物品 一些不耐高温的液体，如牛奶 如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等 接种室 灭菌 接种工具的灭菌 玻璃器皿、金属工具的灭菌 培养基及容器的灭菌 2．选择培养基与鉴别培养基的比较 种类 制备方法 原理 用途 举例 选择培养基 培养基中加入些依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计 从众多微生物中所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 培养基中加入某种或　 依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计 不同种类的微生物　 伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌 易错警示！　(1)稀释涂布平板法的缺点：稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是菌落。 (2)平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同： ①第一次操作：。 ②每次划线之前：。 ③划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，。 二、微生物的筛选和计数 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起作用。 (2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用法。(3)实验流程：土壤取样→→微生物的培养与观察→细菌的。 1．微生物的分离和计数 (1)分离原则：人为提供的条件，同时其他微生物的生长。 (2)菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌 分解纤维素的微生物 ①选择培养基的成分：作为唯一的氮源 ②鉴定方法：在培养基中加入指示剂，若指示剂变，pH升高，说明细菌能分解尿素 ①选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源 ②鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈 2.统计菌落数目的方法 (1)计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积样品中的微生物数量；②方法：用计数板计数；③缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)计数法(计数法) ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于。通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ②操作 a．设置，增强实验的说服力与准确性。 b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。　　　③计算公式：每毫升样品中的菌数＝，其中C代表，V代表，M代表。 名师点睛　应特别关注的三种“组” (1)两种对照组 ①确认培养基是否合格——用一的空白培养基一起培养，若培养基中无菌落生长，则表明培养基未被污染，制备合格。 ②确认培养基是否起到了“筛选”作用——可用一的普通培养基(如牛肉膏蛋白胨培养基)一起培养，若选择培养基中菌落种类数明显普通培养基，则可表明培养基起到了“筛选”作用。 (2)设置重复组 为使结果接近真实值，可将同一稀释度加到的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。考点一　微生物的实验室培养【典例】 (2014·江苏单科，30)为了获得β-胡萝卜素产品，某小组开展了产β-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题。 (1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是__________________；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该________________。 (2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是 ____________________。(3)如图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是________。(填序号)①