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第42讲 生物技术在其他方面的应用
[考纲要求] 1.植物的组织培养。2.PCR技术的基本操作和应用。3.蛋白质的提取和分离。4.实验:DNA的粗提取与鉴定。
考点一 植物组织培养技术[重要程度:]
1.组织培养过程
2.培养基
(1)成分:大量元素、微量元素、有机物、植物激素和琼脂。
(2)类型:MS培养基、发芽培养基和生根培养基。
(3)作用:植物组织或器官生长和发育的营养条件。
(4)配制:称量、溶解、调pH、分装(三角瓶)、灭菌。
3.菊花的组织培养
(1)制备MS固体培养基
(2)外植体消毒
(3)接种:始终在酒精灯旁进行,对接种工具要用火焰灼烧灭菌。将菊花茎段插入培养基中时注意不要倒插。
(4)培养与移栽:在18~22 ℃的无菌箱中培养,得到试管苗后进行移栽。
4.月季的花药培养
(1)被子植物的花粉发育过程
花粉母细胞→小孢子四分体时期→单核期→双核期→花粉粒。
(2)产生花粉植株的两种途径
(3)影响花药培养的因素
①主要因素:材料的选择和培养基的组成。
②其他因素:亲本植株的生长条件、材料的低温预处理及接种密度等。
(4)实验操作
①材料的选取:月季花药培养一般选择单核期,细胞核由中央移向细胞一侧的时期。确定花粉发育时期最常用的方法是醋酸洋红法。某些植物的花粉细胞核不易着色,需采用焙花青—铬矾法,这种方法能将细胞核染成蓝黑色。
②接种:消毒后的花蕾,在无菌条件下除去萼片和花瓣,并立即将花药接种到培养基上。剥离花药时尽量不要损伤花药。
③培养:温度控制在25_℃左右,幼小植株形成后才需要光照。如果花药开裂释放出胚状体,必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开。
1.植物组织培养技术和花药离体培养技术的异同点
项目内容 菊花的组织培养 月季的花药培养理论依据 植物细胞的全能性 基础过程 脱分化→再分化外植体的细胞类型 体细胞 生殖细胞操作流程 制备培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培 选材→消毒→接种和培养→筛选和诱导→移栽→栽培选育影响因素 选材、营养、植物激素、pH、温度、阳光等培养结果 正常植株 单倍体植株 生殖方式 无性生殖 有性生殖 可育性 可育 高度不育,秋水仙素处理后可育 2. 探究植物激素对实验结果的影响
(1)生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素,其作用及特点如下:
①在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。
②使用顺序不同,结果不同,具体如下:
使用顺序 实验结果先使用生长素,后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂,但细胞不分化 先使用细胞分裂素,后使用生长素 细胞既分裂也分化同时使用 分化频率提高 ③用量比例不同,结果也不同
易错警示 实验操作中的注意事项
(1)材料的选取:菊花的组织培养实验中,应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝;月季花药的培养实验中,应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。
(2)外植体消毒:所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液,所使用的清洗液是无菌水。
(3)培养过程:在初期,菊花的组织培养需要光照,月季花药的培养不需光照;而在后期均需要光照。
(4)月季花药培养得到的并不都是单倍体植株:花粉壁发育成二倍体,花药发育成单倍体。
(5)花药开裂长出愈伤组织或释放出胚状体时,应及时转移到分化培养基上。
1.下列关于月季花药培养的叙述,错误的是( )
A.花粉的选择与培养基的组成影响花药培养的成功率
B.选择花药的最适宜时期是完全未开放的花蕾,镜检花粉常用的染色方法是醋酸洋红法
C.选取的材料一定要进行消毒
D.花粉培养形成的胚状体可继续在原培养基中分化形成植株
答案 D
解析 影响花药培养成功率的因素有多种,其中材料的选择与培养基的组成是主要因素;为了挑选到单核期的花药,通常选择完全未开放的花蕾,镜检花粉常用醋酸洋红法;为了避免细菌污染,选取的材料一定要消毒;花粉培养形成的胚状体需转移至新的培养基上,否则植株很难分开。
2.草莓生产中传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代,导致产量降低、品质变差。运用微型繁殖技术可以培育出无病毒幼苗。草莓微型繁殖的基本过程如下:
外植体愈伤组织芽、根―→植株
请回答:
(1)微型繁殖培育无病毒草莓苗时,一般选取________作为外植体,其依据是________________________________________________________________________。
(2)在过程①中,常用的MS培养基主要成分包括大量元素、微量元素和____________。在配制好的培养基中,常常需要添加____________,有利于外植体启动细胞分裂形成愈伤组织。接种后2~
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