中国兰的织培养.doc

中国兰的组织培养 中国兰花是狭义的兰花, 又称国兰、东洋兰, 系蕙兰属( Cymbidium) 中的部分地生兰。按花期可大致分为: 春兰( C.gogeringii) 、建兰( C. ensifololiunm) 、寒兰( C. kanran) 、墨兰( C. sinense) 等, 其味幽香, 花色淡雅, 具有很高的观赏价值。中阶段，才能形成完整植株。 （1）外植体。在国兰组培中, 受技术、母体数量等因素制约, 应用的外植体种类相对较少，使用较多、并较易获成功的是顶芽和腋芽，一般认为顶芽优于腋芽。对复轴生长类型的洋兰更适合茎尖作为外植体。但对稀有名贵的国兰品种而言使用顶芽等于损失了苗，代价太大。春兰、墨兰、建兰等均可用苞叶未展开的新芽的茎尖诱导出大量的类原球茎, 类原球茎发育成根状茎后（根状茎为地下的变态茎之一，横生的肉质茎，具有明显的节和节间，先端生有顶芽，节上通常有退化的鳞片叶与腋芽，并常生有不定根）进一步长成幼苗；茎尖及侧芽带1～2 个叶原基的茎圆锥成活率高, 中间部位侧芽成活率较高，从长l－2 cm、苞叶未展开的新芽上切取茎尖则成功率更高, 过小的外植体不但活力弱, 而且分裂增殖的部位少， 过大的外植体, 诱导困难,容易褐化死亡；种子，兰花种子非常细小, 每粒种子长约1－2 mm, 直径0.1－0.2 mm, 重量只有0.3－6.5 μg, 且种子内的胚多半不成熟或发育不完全，种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物，难以在自然条件下萌发。以后发现兰花种子萌发伴随着真菌感染的现象，从而用兰花根菌感染兰花的种子进行萌发试验,取得共生萌发方法的成功，现在种子的非共生萌发方法亦获成功，并成为兰花组织培养的兴趣点，用0. 1 mol/ L 的氢氧化钠浸泡多花兰、朵朵香、双飞燕、寒兰、套叶兰等10～30 min ,萌发率可提高10 倍以上。风兰( Neofinetia) 的成熟种子用肥皂水洗净后,用70 %的酒精浸泡30 s 利于萌发。这些预处理效果的生理机制虽尚难确定，但兰花种子用于组织培养的前景极富吸引力。大部分的种子可通过无菌萌发的方式进行萌发，附生或半附生兰和气生兰及杂交后代的种子萌发较易,而地生兰种子的萌发较难；有报道用春兰成年植株的根状茎成功诱导出完整植株。 基本培养基。中国兰组织培养的不同阶段对培养基要求不同,如用于原球茎诱导增殖的培养基,常用的是改良的MS、White、VW、Knudson C、Kyoto等。春兰以无机盐浓度高、氨态氮含量低、生长素含量高的培养基为好;蕙兰、建兰等则以无机盐浓度较高,生长素含量较低的培养基为宜。对于培养基中无机盐的量, 春兰( C. goeringii) 要求要少, 惠兰( C.faberi) 要求的量较大, 而墨兰( C. sinense) 则不敏感。蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂, 对原球茎的生长影响较大, 因此一般情况下, 蔗糖是首选碳源, 且不同浓度对兰花组培的作用不同。浓度2 %蔗糖对兰属原球茎生长最好，用浓度2 %～3 %蔗糖促进芽的形成, 而根的分化和生长则用浓度5%蔗糖最适合。 植物生长物质。用0. 5mg/ L NAA + 1. 0mg/ L BA 有利于墨兰根状茎的增殖；培养基中添加2. 0mg/ L BA + 0. 2mg/ L NAA 时,建兰原球茎既能增殖又能分化,成苗率较高且根系健壮；BA(1. 0～5. 0 mg/ L) 与2 ,4- D(0. 5～2. 0mg/ L) 配合使用有利于花梗诱导出原球茎；在MS 培养基中,当细胞分裂素/ 生长素的比值为3. 0 时,愈伤组织的诱导率最高,可达60 %，愈伤组织诱导及芽苗分化适宜的BA 与IBA 的浓度分别为1. 5mg/ L 、0. 5mg/ L , 而添加IBA0. 1mg/ L 与6 - BA0. 5mg/ L 的1/ 2MS 培养基对于外植体的继代增殖及壮苗生根较为有利。 培养方式与条件。春兰原球茎生长与分化成苗在液体培养时有较好结果，显然是振荡培养通气好, 原球茎与液体可充分接触, 能更好地吸收营养；建兰用液体悬浮培养方式明显地促进原球茎的增殖速度和分化成苗程度并可提高原球茎的增殖率； 在兰花的整个生产过程中, 利用半固体培养或液体培养进行原球茎增殖, 利用固体培养分化和生根, 可增加繁殖系数, 降低污染, 减少成本, 有利于大规模生产。培养条件：培养温度在( 25±3) ℃最好，培养室相对湿度一般保持在70 %~75 %最适。培养基一般呈弱酸性, 中国兰比较敏感, pH 值以5.1~5.4 为宜。建兰原球茎增殖较为适宜的pH 值是5.0±0.2, 以pH 值为5.0 最佳。另外, 无机离子与射线辐射对根状茎的生长发育也有作用。在培养基中加入低浓度的La( CH3COO) 3, 可促