植物组织培养综合性实验报告.docVIP

本科学生综合性实验报告 学号： 104120281 姓名： 李胜美 学院： 生命科学学院 专业、班级：10应用生物教育B班 实验课程名称：胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验 教师： 杨 世 忠 开 课 学 期： 2012 至 2013 学年 第二 学期 填 报 时 间： 2012 年 6 月 20 日 云南师范大学教务处编印 实验序号 综合实验一 实验名称 胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验 实验时间 2012年3月-6月 实验室 组培实验室 实验内容 （一）实验目的 1.熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 2.熟悉配制培养基的流程及操作中应注意的事项，学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养基配方。 3.学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织继代增殖培养基配方。 4.学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导细胞悬浮培养基配方。 5.学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导体细胞胚胎发生培养基配方。 6.能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术。 7.掌握愈伤组织状态的调控手段，熟练掌握愈伤组织继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养的基本操作技术。 （二）实验原理、实验流程或装置示意图 1、实验原理 （1）培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。配制培养基时将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 （2）愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木与接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木和接穗沟通；在扦插中，从伤口愈伤组织可分化出不定根或不定芽，迸而形成完整植株。在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。其发生过程是：外植体中的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁组织而形成愈伤组织。 （4）植物细胞全能性是指一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息，在适当的条件下，这些信息可以表达，再生成一个完整植株 （5）悬浮培养（suspension culture）是指将游离的植物细胞按一定的细胞密度，悬浮在液体培养基中进行培养的方法。植物细胞的悬浮培养是从愈伤组织的液体培养的基础上发展起来的。 （6）由单细胞或一群细胞被诱导不断再生非合子胚，并萌发形成完整植株的发育过程称为体细胞胚胎发生。 由此，在胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养中将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导外植体脱分化就产生产生愈伤组织。将由胡萝卜肉质直根诱导产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织增殖培养基上培养，即可实现愈伤组织的增殖。细胞悬浮培养可获得单个细胞。愈伤组织器官分化培养可获得完整植株。 2.实验流程（总） （三）实验设备及材料 1、实验材料 新鲜的质量良好胡萝卜肉质根。 2、实验设备 （1）仪器设备： 冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、电磁炉，三角瓶、果酱瓶、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、封口膜、橡皮筋、棉线、电炉、高压蒸汽灭菌锅、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、酒精棉球、小块纱布、、灭菌锅，超净工作台，恒温培养箱，摇床（震荡培养箱）等。 其中主要仪器设备为灭菌锅，超净工作台，恒温培养箱，摇床（震荡培养箱） 等。 （2）药品 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄基腺嘌呤）、 KT、浓