Chaper 7 翻译.ppt

当40S小亚基扫描5’UTR时，能够破坏这一区域的二级结构（发卡），但非常稳固的发卡结构会妨碍甚至组织小亚基迁移。 当遇到起始AUG时，小亚基停下来。 通常，但不总是遇到的第一个AUG就是起始密码子，不过仅凭这个AUG自身不足以阻止小亚基迁移，只有当它处于正确的上下文（context）时，才能作为起始密码子被有效地识别。 当起始AUG处于 NNNPuNNAUGG 这样的环境时，可以被识别。-3位的嘌呤（A或G）和+4位的G，对翻译效率影响很大，可达10倍。（Kozak序列，Kozak sequence） 当前导序列很长时，在第一个亚基脱离起始位点之前，可其它亚基识别5’帽子结构，这样在5’帽子和起始位点之间，各亚基排队。 多数能高效率翻译的mRNA上的第一个AUG往往是起始密码子。但如果不是，核糖体可能通过渗漏（直接通过扫描至下一个，因其不处在正确的上下文）；有时识别这个AUG，但在正确的AUG前终止翻译，再接着扫描。 大多数真核生物翻译起始事件涉及扫描，但也有采取其它形式的，特别是某些病毒RNA，其小亚基直接结合在一个称作IRES（内部位点）。IRES的同源性不强，据其与40S小亚基的结合，已鉴别出三类： 一种是IRES包括位于其上游边界的AUG 起始密码，40S亚基使用与5’端扫描相同的一组因子，直接与之结合； 另一种是IRES远在AUG上游100个碱基左右，要求40S 亚基以类似扫描的方式移动； 第三种，乙肝病毒（hepatitis C virus ）中 40S亚基直接结合IRES，不需其它任何因子，40S亚基结合上后，一个含有起始因子和起始tRNA的复合物再结合上去。 IRES最早发现于微小RNA病毒。IRES对于微小RNA病毒的感染很重要，因为病毒通过破坏帽子结构和抑制起始因子结合5’帽子，抑制宿主的蛋白合成。起始因子eIF4G结合mRNA的5’端，是病毒作用的一个靶蛋白。因此，病毒侵染阻止宿主的mRNA翻译，允许病毒自身的mRNA翻译，因为它们使用IRES（而无需帽子结构）。 扫描到起始位点时，结合变得稳固。当60S 大亚基加入后，完整的核糖体覆盖的区域可以通过保护实验鉴定。40S 小亚基保护的区域可达60 个碱基，大亚基加入后，保护的区域收缩，跟原核生物一样，大约30至40个碱基。 Key concept 起始的每一个阶段都需要起始因子，包括起始tRNA的结合、40S小亚基结合mRNA、沿mRNA移动以及60S大亚基的加入； 真核起始tRNA是Met-tRNA，由其携带的甲硫氨酸不发生甲酰化； 2 真核生物使用一个由多种因子构成的复合物起始翻译 摘译自 GENES X 24.9, GENES IX 8.9 eIF2结合起始tRNA和GTP，形成的三元复合物结合 40S小亚基，这一过程发生在小亚基结合mRNA之前（这一顺序与原核起始不同） 在小亚基与mRNA作用前，一个结合帽子的复合物结合在5’端， 与原核生物翻译起始一样，真核的翻译起始也使用特异的起始密码子和起始tRNA。真核生物细胞质中的翻译的起始密码子是AUG，起始tRNA记作tRNAiMet，由其携带的甲硫氨酸不发生甲酰化。（延伸使用的甲硫氨酰-tRNA记作Met-tRNAmMet） 真核细胞翻译时，直接或间接参与的起始因子多达12种，其命名类似原核细胞，“e”代表真核。参与起始的各阶段： 在5’端与mRNA形成起始复合物； 与Met-tRNAi形成复合物； 使上述两个复合物结合； 使核糖体从5’端扫描至第一个AUG； 检测起始tRNA与AUG的结合情况； 介导60S大亚基加入。 右图总结了起始的各阶段，以及每个阶段涉及的因子。 eIF2 与 Met-tRNAi、eIF3、eIF1、eIF1A一道结合40S小亚基，形成43S预起始复合物； Figure 7.44 eIF1, eIF1A eIF4A, eIF4B, eIF4E 和 eIF4G 结合mRNA的5’端，形成帽子结合复合物，这一复合物通过 eIF4G 与 eIF4G与PABP（polyA binding protein） 相互作用，进而与mRNA的3’端连接； 43S复合物结合mRNA 5’端的起始因子，扫描寻找起始密码子，这时，复合物可以48S起始复合物形式分离得到。 三元复合物的形成受鸟苷