脂肪酶作用原理与应用领域[精选].ppt

脂肪酶的作用原理与应用领域 报告人：阿衣帕热 内容 脂肪酶（lipase）又称甘油酯水解酶，是指分解或合成高级脂肪段和丙三醇形成的甘油三酸酯酯键的酶。 脂肪酶是一类特殊的酯键水解酶，只作用于异相系统，即只在油水界面上作用，而且只有在当底物以微粒，小聚合分散状态或呈乳化颗粒时，脂肪酶对底物水解才有显著的催化作用。 脂肪酶基本组成单位仅为氨基酸，通常只有一条多肽链。它的催化活性仅仅决定于它的蛋白质结构。 脂肪酶的结构特点 同源区段：His-x-y-Gly-Z-Ser-W-Gly或Y-Gly-His-Ser-W-Gly(X,Y,W,Z是可变的氨基酸残疾）； 活性中心是丝氨酸残疾，正常情况下受1个a-螺旋盖保护。 脂肪酶催化的反应 脂肪酶的来源： 脂肪酶广泛存在于动物植物和微生物中。 植物中含脂肪酸较多的是油料作物的种子，当油料种子发芽时，脂肪酶能与其他的酶协同发挥作用催化分解油脂类物质生成糖类，提供种子生根发芽所必须的养料和能量； 动物体内含脂肪酶较多的是高等动物的胰脏和脂肪组织，在肠液中含有少量的脂肪酶，在动物体内，各类脂肪酶控制消化，吸收，脂肪重建和蛋白质代谢等过程； 细菌，真菌和酵母中的脂肪酶含量更为丰富。由于微生物种类多，繁殖快，易发生遗传变化，具有动植物更广的作用，且微生物来源的脂肪酶一般都是分泌性的胞外酶。 适合于工业化大生产和获得高纯度样品，因此微生物脂肪酶是工业用脂肪酶的重要来源，并且在理论研究方面也具有重要的意义。 微生物脂肪酶：细菌28个属 放线菌4个属 酵母菌10个属 其他真菌23个属 一共65个属的微生物生产脂肪酶 脂肪酶的生产方法 脂肪酶菌株的筛选 筛选路线： 采样→富集培养→初筛→复筛→检测酶活→鉴定菌种→保藏菌种 初筛方法：可淘汰85%-90%不符合要求的微生物利用平皿的生化反应进行分离 Rhodamine B 平板筛选法 筛选原理：只放在脂肪酶的催化作用下水解生成甘油和脂肪酸，脂肪酸能与Rhodamine B 的阳离子发生作用，生成黄色的荧光物质，所以用紫外灯的观察，产脂肪酶的菌株周围会出现荧光圈，依据荧光圈的大小进行菌株的筛选。 溴甲酚紫平板筛选法： 筛选原理：溴甲酚紫作为一种显色剂，其PH变色为5.2-6.8，在碱性条件下显紫色，在酸性条件下鲜黄色，只放在脂肪酶的催化作用下生成的脂肪酸会使培养基的PH降低，产脂肪酶菌株的周围会出现先黄色的透明圈，根据透明圈的有无和大小来筛选产脂肪酶的菌株，透明圈越大说明产脂肪酶活力越强。 琼脂块培养法： 将分离培养基用灭菌的打孔器制作成许多单个的直径约0.6cm的小琼脂块，排放在干净的培养皿内，将套选的菌株接种在这些小琼脂块上培养，让其充分生长。 然后依次再将长满菌的小琼脂块放到酶活测定板上，28℃培养1-3d，观察各菌落周围油脂水解圈的大小，水解菌越大，酶活越强，将水解圈大的菌株纯化后保存在斜面培养基上。 复筛选方法——摇瓶培养 种子培养基→发酵培养基→收集菌体和上清液，分别测酶活。 酶活的测定： 在给定的时间内，脂肪酶酶活大小与其催化水解生成的脂肪酸的量成正比。脂肪酶酶活的测定方法很所，根据原理不同，其中酸碱滴定法和分光光度法最为常用，常用的分光光度法有铜皂显色法和对硝基苯酯法。 测定脂肪酶酶活常用方法的比较 脂肪酶的特性，结构和催化作用原理 脂肪酶的M 脂肪酶的M因其来源不同而差异很大，不同来源的脂肪酶，其氨基酸组成数目从270-641不等，其M从29-100kD变化。 脂肪酶的最适温度和最适PH 脂肪酶的最适温度一般在30-60℃之间，最适PH一般为6-10，不同来源的脂肪酶的最适合的温度和最适合的PH差异也比较大。列入一株无花果假丝酵母的脂肪酶最适温度为42℃，最适PH为8.0，一株青霉突变株的最适温度为25℃，最适PH为10 脂肪酶的界面活化机理 脂肪酶和酯酶都能催化酯的水解，但只有脂肪酶可以催化水不溶性酯的水解。脂肪酶和酯酶的最大差别在于他们与底物的作用形式不同。酯酶的活性随着底物浓度的增加而增大，变现为依赖于底物浓度的正常Michaelis-Menten活性，而脂肪酶则表现出C形曲线， 在底物浓度处于溶解状态下，脂肪酶几乎没有活性，只有当底物浓度逐渐增加到超出其溶解度极限时，才表现出明显增加的活性，这种现象称为“界面活性”。 脂肪酶的类型和生理分布情况 大多数脂肪酶的行动特定位置上的脂至底物（小肠）甘油骨干。列入，人体胰腺酶。只是主要的酶，能分解人体消化系统中