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卡氏住白细胞虫、隐孢子虫文章汇总 姓名：王明威2016年7月23日二一 隐孢子虫文章 卡氏住白细胞虫文章目录AF卡氏住白细胞虫文章BEcD A 复方泰灭净对蛋鸡卡氏住白细胞虫病预防效果实验材料和方法高产海兰白鸡、卡氏住白细胞虫标准抗原、标准阳性抗体A组（169只鸡）血涂片、琼脂扩散法化验30 g/L复方泰灭净统计分析血涂片、琼脂扩散法化验B组（159只鸡）产蛋及存活观察50 g/L复方泰灭净对照组（172只鸡）血涂片、琼脂扩散法化验实验结果复方泰灭净 50 g/ L 组对卡氏住白细胞虫的感染完全保护, 整个试验期间血涂片和琼脂扩散检查均为阴性。 30 g/ L 组基本能够控制其感染, 整个试验期间仅检出 1例抗体阳性, 感染率为 0. 63% ( 1/ 160), 同时未见临床症状。对照组蛋鸡从 5 月份开始至实验结束连续发病并出现血清学阳性反应, 抗体检出率为 27.80%～ 80. 00%, 抗原检出率为 0. 68%( 1/ 158), 裂殖子检出率为 0. 63% ( 1/ 158), 并且出现大量死亡。 B 卡氏住白细胞虫子孢子冻存方法及感染力试验实验材料和方法 32～ 35 日龄的健康 AA 鸡、患卡氏住白细胞虫病鸡A途径子孢子A冻存法 诱捕 库蠓库蠓匀浆玻璃匀浆器 子孢子纯化营养液B途径子孢子病鸡B冻存法B组（6只）D组（6只）A组（6只）C组（6只）注：每组鸡中每两只鸡分别注射0.1ml、0.2、0.3mlA类子孢子B类子孢子注射新鲜子孢子第13天抹片、染色、镜检观察临床症状实验结果 静脉接种未经冻存的新鲜子孢子的鸡全部发病，且随着接种剂量增加，病情亦加重。经 A 途径缓慢冻存的子孢子在较大剂量时可引起鸡发病；经 B 途径冻存的子孢子无论剂量大小均不能引起鸡发病。结论：子孢子的保存应选择A 途径, 而人工发病试验最好使用新鲜的子孢子进行接种。 C 卡氏住白细胞虫配子体的浓集和纯化实验材料和方法4只患卡氏住白细胞虫病鸡单密度分离法分离液的制备样本收集处理配子体纯化计数统计方法 多密度分离法实验结果图 1 采用多密度法纯化 的配子体（1000X）图 2 采用单密度法浓集 的配子体（1000X）图 3 浓集后进一步纯化的配子体（1000X）图 5 鸡外周血液中的 卡氏住白虫配子体 （1000X）实验结论：该二种方法均取得了较好的分离和纯化效果,达到了直接从鸡血液中分离纯化配子体的目的, 纯化的虫体纯度已基本符合虫体代谢、抗原分析及核酸分析研究等工作的要求。 D PCR Amplication and Sequencing of ITS-2 rDNA of Leucocytozoon caulleryiMATERIALS AND METHODSDiseased chickens (the huge schizonts were isloated from muscle ,heart, liver, and other tissues. cloningsequencing analysisPCRamplificationDNA extracte DNA UNIQ-5 spin column purification kiturITS-2。RESULTSRestriction patternof recombinant plasmidPCR Amplication of ITS-2 rDNA of Leucocytozoon caulleryi E 卡氏住白细胞虫 rDNA ITS-2 的 PCR扩增与测序实验材料和方法广州某鸡场病死鸡（从肌肉组织及心脏等部位采集卡氏住白细胞虫巨型裂殖体）卵囊纯化DNA提取ITS2PCR扩增 鉴定回收产物克隆筛选DNA测序分析实验结果1. 虫体扩增片段; 2. 鸡肌肉扩增片段; 3. 空白对照1. SalI 酶切重组质粒; 2. 重组阳性质粒; 3. EcoRI 酶切重组质粒结论：根据上述比较分析，本试验所测为卡氏住白细胞虫的 ITS-2 及部分 5. 8S 和28S( ITS2+ ) 序列，其中 ITS-2 序列为卡氏住白细胞虫种特异性序列。 F 卡氏住白虫病 PCR 诊断方法的建立实验材料和方法卡氏住白虫虫体材料（采自广州花都某鸡场病鸡）、 微孢子虫DNA、 弓形虫 DNA、 疟原虫DNA、荒川库蠓 DNA。特异性试验PCR条件优化卵囊纯化虫体DNA提取引物设计稀释 ITS2PCR扩增产物回收测序敏感性实验实验结果图 3 敏感性试验图 1 氏住白虫ITS-2 扩增结果图 2 特异性试验1.10ng/μl 2.1ng/μ l 3.100pg/μl4.10pg/μl 5.1pg/μ l 6.100fg/μ l 7.10fg/μ l 8.1fg/μ l DNA1. 卡氏住白