模拟多野三维适形浅析.ppt

模拟多野三维适形放疗对人HeLa细胞生物效应的研究 指导 教师：刘珊珊 副教授研 究 生: 刘 阳 材料与方法 实验所需材料及设备如下: 人宫颈鳞状上皮细胞癌HeLa细胞系由黑龙江省肿瘤医院研究所提供，培养液为RPMI1640(含10%的胎牛血清），国产塑料培养瓶（规格为30毫升），日本OLYMPUS IX70型荧光倒置显微镜，美国Forma公司电热恒温培养箱，山东新华加速器6MV高能X射线。 材料与方法 实验方法: 一 细胞培养 1、细胞复苏 2、传代培养 3、接种细胞 材料与方法 二 实验分组与照射方法 将上述接种在不同培养瓶中的细胞分组，共分为三个组：1空白对照组：细胞不进行照射，直接放孵箱培养待测。2急速照射组：包括1、2、4、6、8、10Gy共6个照射剂量点，每个剂量点的照射完成时间为1～2min。3模拟多个 材料与方法 照射野的三维适形照射10min组：所含的剂量点同急速照射组。按物理师的设计要求对各个剂量点进行照射，1Gy剂量点分3次照射，间隔3～4min，2Gy和4Gy剂量点分4次照射，间隔2min，6、8、10Gy剂量点分5次照射，间隔1～2min，照射完成总的时间为10min。采用山东新华加速器6MV高 材料与方法 能X射线照射，剂量率为：3Gy/min 。 材料与方法 三 集落形成实验 细胞照射完毕后，立即放入37℃、5%CO2孵箱内培养，定期更换培养液，约两周后，弃去培养液，用PBS冲洗两次，甲醇固定15分钟，弃掉固定液，加适量Giemsa染色20分钟，再用缓冲液小心冲洗去染色液，于荧光倒置显微镜下计数每瓶形成的克隆数(含50个 材料与方法 细胞以上的为一个克隆），根据成克隆实验法计算细胞存活分数，并绘制细胞存活曲线。 注：细胞存活分数SF=受照射细胞的贴瓶率/对照细 胞的贴瓶率 对照细胞贴瓶率=克隆数/接种的细胞数 材料与方法 观察指标 运用多靶单击数学模型拟合曲线求出Dq、Do、N等参数值。 结　果 细胞存活曲线（cell survival curve）是用来定量描述放射吸收剂量与存活细胞数量之间关系的一种方法，是研究放射治疗肿瘤的基础。 结　果 １　不同处理条件下的细胞存活分数见表一 表1 不同处理组的细胞存活分数 结 果 从表中的细胞存活分数可以看出：当放射剂量不变时，延长照射时间的情况下，细胞的存活分数是较常规照射提高的。 结　果 ２不同照射模式下的HeLa细胞存活曲线如图示 结　果 ３不同照射模式下HeLa细胞的生物学参数见表二 表2 不同照射模式下 HeLa细胞的生物学参数 　 讨　论 三维适形放射治疗（3DCRT）技术具有物理学上的高度精确性，逐渐成为肿瘤放射治疗领域的主流技术，但是这一新技术在生物学上存在的不足之处也值得我们进一步的研究和探索。 多个照射野的设置，使其在照射实施过程中，需要分步进行，不同的照射野之间强度可能会有所不同，因此照射过程中所耗费的时间会比普通的常规放射治疗长，即常规照射时一次性给予的剂量分成了多次给予，这就形成了相对剂量率的降低。 讨 论 急速照射是指剂量率在2Gy/min以上的照射，在多数真核细胞系统中有生物学意义的照射剂量将在数分钟内给完，在照射过程中极少发生或不发生DNA单链断裂的修复，亦看不见剂量率效应。 慢速照射是指剂量率低于2×10-3Gy/min，在多数真核细胞系统中，有生物学意义的照射剂量将需要数小时才能给完，DNA单链断裂的修复大致是完全的。 讨 论 剂量率低于2Gy/min但高于2×10-3Gy/min称为迁延性照射，在这个区域里，有生物学意义的照射剂量的给出时间和DNA单链断裂的修复速率常数差不多，可以观察到剂量率效应，表现为剂量率变化时生物效应关系也随之变化。 讨 论 放射生物研究细胞和组织最常用的剂量率是1～5Gy/min，这也是临床外照射常用的剂量率，因此对每次2Gy的照射而言，照射时间不会超过几分钟，在这段时间里可发生由照射引起的初始化学效应（如自由基的形成），但对DNA损伤的修复或任何其他生物过程的发生是不够的。 讨 论 但是随着剂量率的下降，给予即定剂量所需的照射时间延长，照射期间便可能发生一些生物学过程，以修饰所观察到的放射反应，这个过程可用“4Rs”来描述，即：亚致死损伤的修复（repair of sublethal damage) 、周期内细胞的再