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第一章 绪论 一、填空题 1．基因工程是 70 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。基因工程技术的诞生，使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代，走向 按人们的需要而定向地改造和创造具有新的遗传性品种 的时代。 2．随着基因工程技术的诞生和发展，人类可以通过 细菌发酵 、 真核细胞培养 和 乳腺生物反应器 等三种主要生产方式，大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白，用于研究或治病。 3．Cohen 等在 1973 年构建了第一个有功能的重组 DNA分子。 4．基因工程的两个基本特点是： (1) 分子水平上的操作 ，(2) 细胞水平上的表达 。 5．基因克隆中三个基本要点是： 克隆基因的类型 ； 受体的选择 和 载体的选择 。 6． 1972 年，美国斯坦福大学 P．Berg 等在 Proc．Natl．Acad．Sci．USA 上发表了题为：“将新的遗传信息插入 SV40 病毒 DNA 的生物化学方法：含有λ噬菌体基因和 E．coli 半乳糖操纵子的环状 SV40 DNA”的论文，标志着基因工程技术的诞生。这一工作具有划时代的意义，但是他们并没有 证明体外重组的 DNA 分子具有生物学功能 。 7．克隆基因的主要目的有四个：(1) 扩增 DNA ； (2) 获得基因产物 ； (3) 研究基因表达调控 ； (4) 改良生物的遗传性 。 二、选择题(单选或多选) 1．因研究重组 DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( C ) (a)A．Komberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock 2．第一个作为重组 DNA 载体的质粒是( C ) (a) pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8 3．第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是( A ) (a)EcoRI (b)EcoB (c)EcoC (d)EcoRⅡ 4．P Berg 构建 SV40 二聚体时用了几种不同的酶，其中( B )的作用是制造隐蔽的 5’端。 (a)末端转移酶 (b)λ外切核酸酶 (c)外切酶Ⅲ (d)DNA连接酶 三、简答题 1．为什么说基因工程技术是 60 年代末 70 年代初发展起来的? 答： 这是因为：(1)1967 年发现了连接酶；(2)大肠杆菌的转化技术是 1970年获得突破；(3)限制性内切核酸酶的分离始于1970年；(4)Berg在1972年构建了第一个重组的DNA分子。 2．重组 DNA的含义是什么? 答：将一个生物的 DNA 片段插入到一个载体中，并引入到另一生物体中进行繁殖。 3．如何理解基因工程的两个特点? 答：基因工程的两个基本特点是分子水平的操作和细胞水平的表达。分子水平的操作包括 DNA分离、切割和连接(还有其他一些 DNA的修饰等)。由于体外重组 DNA的最终目的是要改变生物的遗传性，所以分子水平的操作和细胞水平的表达是基因工程的两个最基本的特点。 4．在 Cohen 构建有生物功能重组体的第一步实验中，用 EcoRI 切割了 R6-5 质粒，然后转化 E．coliC600，在卡那霉素抗性子板上筛选到了 pSCl02，它是由 R6-5 的三个 EcoRI 片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性? 答： 至少可说明两点：(1)pSC 102 含有复制起点，是一个独立的复制子；(2)重组 DNA分子中的卡那霉素抗性基因得到了表达。 5．什么是动物乳腺生物反应器? 答：够分泌乳汁的转基因动物生产其他来源的基因产品，并通过乳腺分泌出来。 四、问答题 1．S．N Cohen 于 1973 年构建了三个重组体，pSCl02， pSCl05，pSCl09 请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么? 答： pSCl02：用 EcoRI切割 R6-5，混合转化大肠杆菌，在卡那霉素抗性平板上选择了一个克隆，并从该克隆中分离了重组质粒 DNA，命名为 pSCl02。该质粒是由质粒 R 6-5的 EcoRI酶切片段Ⅲ、V和Ⅷ在体内连接的，说明可以利用体内连接构建重组体。 pSCl05：作者