分析化学本专业色谱实验内容..docVIP

实验内容：以下四个实验 实验时间： 14周一至周四 其中周1，周2开实验1和实验2 周3周4 开实验3和实验4 也就是说GC-MS实验时间为14周周一至周4下午和晚上 一共有三年级和四年级共4各班。 第14周 星期1 星期2 星期3 星期4 下午 四年级（4） 四年级（5） 四年级（4） 四年级（5） 晚上 三年级（3） 三年级（5） 三年级（4） 三年级（5） 实验1：色谱参数的测试及计算(色谱理论验证性实验) 实验2：GC-MS 用于某某挥发性成分的分析 实验3 GC-MS与保留指数联合定性分析未知样品 实验4 高效液相色谱法测定三种胺基酸（梯度洗脱） 实验1 色谱参数的测试及计算(色谱理论验证性实验) 一、目的要求 1. 通过本实验基本色谱参数的测试与计算，定量地了解溶质组分在色谱柱过程中热力学和动力学作用的量度。 2. 理解各色谱参数的意义及其相互关系。 3. 通过本实验进一步掌握柱效、柱选择性、分离能力、保留值等性质，使之能选择出最佳色谱操作条件，得到可靠的定性，定量结果。 二、测定意义 通过试验，了解色谱中的各个基本参数， 从色谱图中学会参数的获得及各基本参数计算。在规定的色谱条件下，测定惰性组分的死时间（tM）及被测组分的保留时间（tR）、半高峰宽（W1/2）、及峰高（H）等参数，便可计算出基本色谱参数值。 1 调整保留时间：用公式计算出 2 相对保留值： 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 计算出(正庚烷, 正已烷)；( 乙酸正丁酯, 正已烷)；( 正辛烷, 正已烷)的相对保留值，以正已烷作标准。 3 容量因子： 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 计算出正已烷；正庚烷；乙酸正丁酯；正辛烷的K’，以其中K’=2-5的组分进行计算。 4 理论塔板数：以其中K’=2-5的组分进行计算。 　　　　　　　　　　　　　　　　 5 有效塔板数：以其中K’=2-5的组分进行计算。当K’足够大时理论塔板数与有效塔板数是否近似相等。 6 分离度：计算出较难分离二组分的分离度。 7 分离数：计算出任意二相邻正构烷烃峰之间的TZ值（即二峰间可容纳的峰数）。 8 保留指数：计算出任意二相邻正构烷烃峰之间的I值 三、方法原理 “塔板理论”：把色谱柱看作一个有若干层塔板的分馏塔，通过物质在每层塔板中进行平衡的物理模型过程，导引出一个描述色谱流出曲线的数学表达式： 式中 c——色谱流出曲线上任意一点样品的浓度； n——理论塔板数； m——溶质的质量； VR——溶质的保留体积，即从进样到色谱峰极大点出现时通入色谱柱中载气的体积； V——在色谱流出曲线上任意一点的保留体积。 四、仪器与试剂 仪器 气相色谱仪一套，邻苯二甲酸二壬酯与吐温混合固定液填充柱（DNP柱）1m×3mm；微量注射器(5—10μl)一支 试剂 甲烷，正己烷，正庚烷，正辛烷，乙酸正丁酯，混合样。 五、实验步骤 1．联结好仪器系统，检查并排除故障至正常工作状态 2 .色谱条件　ＴＤ=120°C，ＴＣ=100°C，Ｔi　=120°C；载气H２流速40 ml／min；进样量：空气50μl，乙酸正丁酯+n-C06+n-C07 +n-C08混合样1μl；纯样进0.4μl。信号衰减视灵敏度而定。 3．色谱条件 Tj＝120℃，Tc＝100℃，Td＝120℃；载气：N2流速30m1／min，H2流速40ml／min，空气流速350m1／min记录仪灵敏度10mV／25cm,纸速10mm／min；甲烷,乙酸正丁酯+n-C06n-C07+n-C08混合样4μ1，信号衰减视灵敏度状况而定。 4．测试 待仪器开启运行至基线平稳后，取纯净CH4样品10μ1注入GC仪器系统(如信号过大则可以适当减少进样量)，计时，准确记录保留时间(tM)。重复进样5－10次，至tM值绝大多数重复为止。取其平均值，为本实验的tM值[tM (甲烷)]。再取四种混合组分的样品溶液4μl注入仪器系统，得到较理想谱图后，再重复进样3－ 5次，取其平均保留时间为本实验各组分的保留时间[tR (乙酸正丁脂)，tR (正已烷)、tR (正庚烷)、tR (正辛烷)]。 5．测试结果 在仪器操作条件稳定无误的情况下，应得到分离状况良好的色谱图 六、数据处理 1、记录甲烷的tR值和四组分混合样的各保留值(平均值)。令 tn-1=tR(正己烷); tn=tR(正庚烷);tn+1=tR (正辛烷);ti=tR (乙酸正丁酯). 2．测量并记录各组分的半高峰宽Wh/2 3．各基本参数计算：2和峰宽W值 (1)调整保留时间：以t R = tR －tM关系计算出tn-1、 tn 、tn+1 及ti； (2)相对保留值(ri