青霉素课件.pptVIP

（三）青霉素的作用及应用范围 青霉素的毒性微低，但最易引起过敏反应。常见的过敏反应有过敏性休克、血清病型反应、各器官及组织的过敏反应等。特别是过敏性休克反应，如不及时抢救，危及生命。因此，凡应用青霉素药物都必须先做皮试，皮试阳性者禁用。 二、青霉素发酵 1、菌体的生长发育 青霉素在固体培养基上开始生长时，孢子先膨胀，长出芽管并急速伸长，形成隔膜，繁殖成菌丝，产生复杂的分枝，交织为网状而成菌落。 菌落一般都是圆形的，其边缘或整齐，或呈锯齿状、或呈扇形。在发育过程中，气生菌丝形成大梗或小梗，于小梗上着生分生孢子，排列成链状，整个形状似毛管，称为青霉穗。 2、青霉素产生菌的生长过程 分生孢子发芽期 菌丝繁殖期 脂肪粒 形成期 脂肪粒减少，小空孢 大空孢 自溶 （一）青霉素产生菌 3、菌种的培养 种子培养阶段以产生丰富的孢子（斜面和米孢子培养）或大量健壮菌丝体（种子罐培养）为主要目的。 在培养基中应加入丰富的易代谢的碳源（如葡萄糖）、氮源（如玉米浆）、缓冲pH值的碳酸钙以及生长所必须的无机盐，并保持最适生长温度25-26℃和充分的通气搅拌，使菌体量倍增达到对数生长期，此期要严格控制培养条件及原材料质量以保证种子质量的稳定性。 （二）青霉素的发酵生产 （二）青霉素的发酵生产 （二）青霉素的发酵生产 4、工艺要点 （二）青霉素的发酵生产 发酵以葡萄糖、花生饼粉、尿素、硝酸铵、硫代硫酸钠、苯乙酸和碳酸钙等为培养基。 对于分批发酵来说，这一过程又分为菌体生长和产物合成两个阶段。前一阶段是菌丝的快速生长，这可以通过限制糖的供给来实现。在生产阶段维持一定的最低比生长率，对于抗生素的持续合成十分重要。因此，在快速生长期末所达到的菌丝浓度应有一个限度，以确保生产期菌丝浓度有继续增加的余地；或者在生产期控制一个与所需比生长率相平衡的稀释率，以维持菌丝浓度保持发酵罐传氧能力所能允许的范围内。 泡沫的控制 在发酵过程中产生大量泡沫, 可以用天然油脂, 如豆油、玉米油等或用化学合成消泡剂泡敌来 消泡, 应当控制其用量并要少量多次加入,尤其在 发酵前期不宜多用, 否则会影响菌体的呼吸代。 铁离子的影响及控制 三价铁离子对青霉素生物合成有显著影响，一般 发酵液中铁离子超过30ug/mL,则发酵单位增长缓 慢。在铁质容器罐壁涂以环氧树脂等保护层使铁 离子控制在30ug/mL以下。 前体的影响及控制 苯乙酸或其衍生物苯乙酰胺、苯乙胺、苯乙酰 甘氨酸等均可作为青霉素G的侧链前体。前体 对青霉菌的生长发育有毒性，其毒性大小取决 于培养基的pH值和前体的浓度。一般认为发酵 液中前体浓度始终维持在0.1%为宜。补氮是指 加硫酸铵、氨水或尿素, 使发酵液氨氮控制在 O.01%-0.05%，补前体以使发酵液中残存苯乙 酰胺浓度为0.05%-0.08%。 （三）青霉素的提取和精制 目前工业上多用溶剂萃取法。青霉素与碱金属所生成的盐类在水中溶解度很大，而青霉素游离酸易溶解于有机溶剂中。将青霉素在酸性溶液中转入有机溶剂（醋酸丁酯、氯仿等）中，然后再转入中性水相中。经过这样反复几次萃取，就能达到提纯和浓缩的目的。 由于青霉素的性质不稳定，整个提取和精制过程应在低温下快速进行，并注意清洗和保持在稳定的pH值范围。 发酵液的预处理 青霉素发酵液菌丝较粗大，一般用鼓式过滤机过 滤。除菌丝出现自溶情况外，一般过滤较容易。 但发酵液达最高单位时，常常也是菌丝开始自溶 的时候。最好控制在菌丝自溶前放罐。滤液PH值 在6.2-7.2之间，略发挥，棕黄色或棕绿色。蛋白 质含量一般在0.5-2.0mg/ml,这些蛋白质的存在对 后续各步提取有很大影响，必须去除。发酵液放 罐后需冷却至10度后，经鼓式真空过滤机，然后 用硫酸调PH=4.5-5.0，加入0.07%的溴代十五烷吡 啶PPB,同时再加入硅藻上（0.07%）作为辅助剂， 通过板框过滤机过滤，得二次滤液。二次滤液一 般澄清透明，可进行提取。 PH选择 青霉素在酸性条件下极易水解破坏，生成青霉素酸，但 要使青霉素在萃取时转入有机相，又一定要在酸性条件 下，这一矛盾要求在萃取时选择合理的PH值及适当浓度 的酸化液。 而从有机相转入水相时，由于青霉素在碱性较强的条件 下极易碱解破坏，但要使青霉素在反萃取时转入水相， 有一定要在碱性条件下。这一矛盾要求在萃取时选择合 理的PH值及适当浓度的碱性缓冲液。 结合青霉素在各种PH值下的稳定性，一般从发酵液中萃 取到醋酸丁酯时，PH值选择在1.8-2.2范围中，从而丁 酯相反萃取到水相时，PH值选择在6.8-7.4范围内对提 取有利。 脱色，脱水 在二次丁酯萃取液中加入质量浓度0.3%的活性 炭搅拌10min进行脱色，石棉过滤板过