b第五章基因工程的常规技术下.pptVIP

2. cDNA文库的构建 cDNA第二链的合成之二 2. cDNA文库的构建 双链平头cDNA的克隆 2. cDNA文库的构建 三、酵母双杂交系统 1. 酵母双杂交系统的基本原理 酵母双杂交系统是由Fields和song 在20世纪90年代建立起来研究蛋白质相互作用的技术手段。 基本原理：真核生物的转录激活子一般是由两个结构上分开的、功能上相互独立的结构域组成，即一个DNA结合域（BD）和一个转录激活域（AD）。BD为识别位于靶基因上游的一个特定区段，并与之激活；AD则同其他成分结合来启动下游基因的转录。 一般情况下它们是同一种蛋白质的两个组成部分，是激活基因转录的必要条件，分开单独存在时仍具有其原来的功能，但不能其始转录。 1. 酵母双杂交系统的基本原理 这个方法主要由4个部分组成：AD、BD、报告基因和诱惑基因组成。 AD和BD可来自同一个转录激活子的两个结构域，也可来自两种不同转录因子结构域的不同部分，但在体内其他蛋白质相互作用下都可以重新连接成转录因子，并具有转录功能，激活下游报告基因的表达。 常见的AD和BD来自于Gal4和LexA，下游报告基因的表达产物一般会引起荧光或显色反应，易于检测。 1. 酵母双杂交系统的基本原理 1. 酵母双杂交系统的基本原理 1. 酵母双杂交系统的基本原理 1. 酵母双杂交系统的基本原理 两种载体在构建融合基因时，测试蛋白基因与结构基因必