Quantitativeimpurityanalysisofrecombinantpharmaceuticalproteinbyimmunoassay.pptVIP

七、免疫亲和色谱法 (affinity chromatography) 基本原理：利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物，使目标产物得到分离纯化的液相层析法 第三节、重组蛋白药物中杂质分析 产品相关杂质 工艺相关杂质 一、宿主蛋白(HCP)残留 CHO宿主蛋白残留 ? E-coli宿主蛋白残留 ? 酵母菌宿主蛋白残留 ? HEK293宿主蛋白残留 评估HCP定量用多克隆抗体的特异性 2D分离CHO、酵母、大肠杆菌等细胞系的全蛋白谱 将2D Gel上的全蛋白转移至膜上，用多克隆抗体孵育后进行Western Blot化学发光检测，以确认多克隆抗体能够与哪些宿主细胞蛋白结合 通过Western Blot检测结果（多抗能检测到的HCP数量）与2D膜上检测结果（总HCP数量）的比较，得出用于评价检测的多克隆抗体特异性及适用性的Match Rate 二、宿主蛋白（HCP）残留检测 Cygnus??F550?CHO?HCP?ELISA?Kit 试验原理: 采用双位点酶联免疫检测法，在酶标板微孔条上预包被抗CHO CHP多抗，免疫反应构成为夹层式结构：固相抗体-HCP-酶标记抗体。反应结束后清洗酶标板去除未结合反应物，添加TMB底物显色，吸光值与样品中CHO宿主蛋白的含量成正相关。 检测步骤： （1）于每个反应孔中，加入100 μL抗CHO HCP多抗-HRP； （2）从标