2014浙江湖州高中生物教研活动：转基因抗虫水稻概览.ppt

转基因抗虫水稻那些事儿 一、基因工程的那些事儿 二、他的那些事儿 三、我的那些事儿 四、我们和他们的那些事儿 如果知道离开该基因一定距离上的DNA序列，则可用这个DNA序列作探针，通过染色体步移来逐步接近并最后获取目的基因。 千种动植物基因组计划 水稻、熊猫、黄瓜、家蚕、蚂蚁的基因组研究成果已发表； 牡蛎、阿拉伯骆驼、石斑鱼、浙东白鹅的测序工作已经完成。 GenBank是美国的基因序列数据库，汇集并注释了所有公开的核酸序列。 常用的标记基因 1、使用最多的抗生素抗性基因有 HPT基因(抗潮霉素) CAT基因(抗氯霉素) SPT基因(抗链霉素) 2、常用的抗除草剂基因 EPSP基因(抗草甘膦) 标记基因的剔除 标记基因并不参与植物的性状改良，在完成筛选后它在植物中的存在便是多余的。 抗生素抗性基因一旦转移到危害人类健康的微生物中就会为其提供抗药性， 除草剂抗性基因如果转移到杂草中就会使其获得除草剂抗性而成为“超级杂草”。 剔除标记基因的方法有两类：分离剔除和重组剔除。 通过标记基因与目的基因分别插入到植物基因组的非连锁位点上，再经减数分裂实现标记基因与目的基因的分离剔除标记基因。 将标记基因构建在DNA裁剪单元中，由起裁剪作用的酶(重组酶或转座酶)识别并切除裁剪单元，从而将标记基因从植物基因组中剔除。 安全标记基因 越来越多的安全标记基因被用于植物遗传转化。 目前应用到的安全标记基因： 甜菜碱醛脱氢酶基因 叶绿素合成酶基因 木糖异构酶基因 对研究生而言，每天工作12小时是正常的，少于这个时间就不正常了 每周工作六天半以上是正常的，少于六天半就不正常了 我们众多的课题组中如三个月没有任何进展就不正常了 “2009年第二批农业转基因生物安全证书批准清单”上批准两个由张启发团队研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”和“Bt汕优63”，首次获得农业部为转基因水稻颁发的安全证书，并准予在湖北省范围内进行种植。 转CrylAb／c基因的抗虫水稻 “华恢1号”是采用基因枪方法将质粒pFHBTl(含CrylAb／c融合基因)和p2GLRC7(含标记基因HPT基因)共转化到”明恢63”中，获得纯系。 “Bt汕优63”也采用相同的方法获得。 “华恢1号”和“Bt汕优63”转基因水稻的毒蛋白基因在整个生育期的各个部位都表达。早期表达量高于晚期。种子中表达量低。 对水稻主要害虫二化螟、三化螟和稻纵卷叶螟等螟蛾科害虫均具有较好防效，控制效率均在 90% 以上，但对大螟的防效较低，晚稻上的控制效率仅为44%—64%。 CrylAb毒蛋白能在“转基因水稻—褐飞虱—黑肩绿盲蝽”食物链中的传递和富集 来源：实验中发现转基因水稻对二化螟的抗 虫效果存在地理差异。 方法：1、全国18个地理点采集二化螟同  龄幼、成虫（湖北省内采集转基因 种植物区和非转基因种植区二化螟）2、PCR扩增线粒体基因COI、COII、 Cytb、16srDNA、12srDNA、ND13、提纯并测序各基因序列4、分析进化关系5、结论 结论 中国的二化螟很可能分化为遗传上不同的、与地理位置相一致的3个分支，即华中分支，西南分支和北部分支。 二化螟地理临近地区的种群间的基因交流水平较低； 二化螟在转基因水稻种植区和非转基因水稻种植区的多个世代中没有明显的遗传多样性改变 谢谢大家！ 西南分支 北部分支 东南分支 * * ——桐乡市茅盾中学生物组 王雪锋 获得目的基因 形成重组DNA分子 将重组DNA分子导入受体细胞 筛选含目的基因的受体细胞 目的基因的表达 目的基因的获取 D PCR法 C cDNA法 A 鸟枪法 E 化学合成法 B 基因文库 基因工程的那些事儿 一、从基因文库中的筛选目的基因 1、染色体步移 基因工程的那些事儿 染色体步移法克隆基因示意图 基因工程的那些事儿 2、利用基因组计划 基因工程的那些事儿 基因工程的那些事儿 二化螟线粒体基因Cytb 二化螟线粒体全基因组序列 一、 cDNA法获取目的基因 基因工程的那些事儿 5‘ppp’ G G AAAAAAAAAAAAAAOH TTTTTTTTTTTTTTTTT-- 纤维素柱 无多聚A尾巴的其他物质 无法结合 一、 cDNA法获取目的基因 mRNA 1.cDNA第一链的合成 5‘ppp’5 G G AAAAAAAAAAAAAAOH3’ TTTTTTTTTTTTTTp5’ 5‘ppp’5 G G AAAAAAAAAAAAAAOH3’ cDNA第一链 5‘ppp’5 G G AAAAAAAAAAAAAAOH3’ TTTTTTTTTTTTTTp5’ 逆转录酶 dNTPs 引物 基因工程的那些事儿 2.cDNA