病理学实技术重点.docVIP

1.什么是病理学技术？ 病理学技术（组织标本切片和染色技术）是组织学、病理学等学科用于观察和研究组织与细胞的正常形态及病理变化的常用方法。 2.组织制片的目的。 生物学标本在生活状态下多为无色透明，而且组织一旦离开机体后很快就会死亡，其结构就会失去正常状态,必须对组织采取固定、切片和染色措施！ 3.何谓组织制片技术？ 组织经过固定、切片和染色后，光波通过被检组织成分时，波长和振幅发生改变，在显微镜下能清晰的观察其组织结构，称之为光镜标本的基本制作方法或称为组织制片技术。 4.组织制片种类及其各类方法的分类。 （一）组织非切片制作方法：组织分离标本 组织活体标本 组织涂片标本 磨片标本 整体封存（压片）标本 组织铺片标本 组织印片标本等 （二）组织切片法：1.石蜡切片法 2.火棉胶切片法 3.冰冻切片法 4.超薄切片法（电镜技术） 5.树脂切片 6.碳蜡切片 5.组织制片的主要程序。 取材、固定----脱水-----透明、浸渍-----包埋、切片----贴片、染色---浸洗----脱水----透明----封固 6.实验动物处死常用方法及优缺点。 1）挥发性麻醉剂（吸入麻醉） 　包括：乙醚、氯仿等。 优点：乙醚吸入麻醉适用于各种动物，安全度亦大，动物麻醉深度容易掌握。 缺点：是对局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液体分泌增多、肺部充血，再通过神经反射可影响呼吸、血压和心跳活动，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醚时必需有人照看，以防麻醉过深而致动物死亡。 2）非挥发性麻醉剂（注射麻醉）　 这类麻醉剂种类较多，包括10%苯巴比妥钠、4%戊巴比妥、5%硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，20%氨基甲酸乙脂（乌拉坦）和1%水合氯醛、氯胺酮等，可通过肌肉注射、静脉注射、腹腔注射。 优点：这些麻醉剂使用方便，一次给药可维持较长的麻醉时间，麻醉过程较平衡，动物无明显挣扎现象。 3）断髓（脱臼）法 动物处死过程中动作要迅速，尽量避免其长时间处于痛苦或濒于死亡状态，以免机体内组织或细胞结构发生改变引起人工假象。 4）空气栓塞法 适用于较大的动物，如兔、猴、犬等。 迅速方便，但可使内脏器官或多或少的呈现瘀血，如心内膜下瘀血、肝血窦扩张 7.组织取材注意事项。 1.材料保持新鲜：2.标本大小适宜：3.勿使组织块受挤压：4.尽量保持组织的原有形态：5.选好标本切面：6.保持材料的清洁：7.切除不需要部分8.明确编号，登记 8.什么是固定，其意义及目的？ 固定： 是指从人体内或动物体内取下的材料立即浸泡在化学试剂中，借助化学试剂的作用，将组织细胞结构保存起来，使其形态结构近似生活状态的一种手段。 意义 保持细胞、组织的固有形态和结构 目的 （1）防止标本的自溶与腐败，以保持组织细胞的固有形态。 （2）使组织细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种物质成份沉淀或凝固成不溶性物质，以保持它原有的结构与生活时相仿。（3）可增强染色的作用。使组织中的各种物质沉淀凝固而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。（4）固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片。（5）防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。 另外，对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。 固定的作用： 防止组织的自溶与腐败 使细胞内蛋白质凝固 保持组织的固有形态和结构 保持组织或细胞的抗原性 9.常用的固定方法。 蒸汽固定法 、标本固定（侵泡固定）、 灌流固定 （局部固定---心脏、睾丸、肺，全身固定（灌注量和灌注压是全身灌注过程最重要 的两个因素。）---适用于缺氧敏感的组织）、涂片固定（侵泡固定、滴液固定）、散在细胞固定、微波固定 10.影响固定的因素及注意事项？ 1 .组织固定必须新鲜：无论取人体或动物组织，都必须立即投入固定剂。 2.防止组织因固定剂的作用而发生变形： 3.标本大小：在保证形态结构完整性的同时，厚度不超过5mm。 4.固定液的量：一般为组织块体积的20-30倍（不得少于标本体积的5倍）。5.固定时间：根据组织的种类、大小，固定剂种类、性质、渗透力的强弱而定。 6.固定温度：室温（20-25℃）或低温（如4℃），一般不应超过40-45 ℃ 。7.选择适当的固定液：8.促使固定： 11.常用的固定剂有哪些？ 1、单纯固定剂 甲醛37℅ -40℅的甲醛水溶液，即市售福尔马林、37℅ -40℅甲醛当做100%福尔马林10mL+蒸馏水90mL此液实际上为4℅甲醛水溶液、多聚甲醛、乙醇、醋酸、苦味酸、锇酸、丙酮、重铬酸钾、戊二醛等 2、 混合固定液 Karnoversy’s改良液、Bo