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第四章 紫外-可见 分光光度法 学习目标 1. 掌握紫外-可见分光光度法的原理； 2. 熟悉紫外-可见分光光度计的结构及各部分作用，了解不同类型分光光度计的结构； 3. 了解紫外-可见分光光度法实验条件的选择； 4. 掌握紫外-可见分光光度计的定性定量方法。 引言：什么是紫外-可见分光光度法？ 是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。 主要内容 §4.1 基本原理 §4.2 紫外-可见分光光度计 §4.3 分析条件的选择 §4.4 紫外-可见分光光度法的应用 §4.1 基本原理 一、透光率和吸光度 1.透光率 一、透光率和吸光度 2.吸光度A 表示物质对光的吸收程度。 吸光度A的公式： 吸光度A与透光率T变化相反，吸光度愈大，物质的吸光能力越强 二、郎伯-比尔定律 （一）光的吸收定律 当一束平行的单色光通过某一均匀、无散射的含有吸光物质的溶液时，在入射光的波长、强度以及溶液的温度等因素保持不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓度C 及溶液层的厚度l 的乘积成正比关系。称为郎伯-比尔定律： 二、郎伯-比尔定律 （一）光的吸收定律 吸光度具有加和性，即如果溶液中同时存在多种吸光物质，那么，测得的吸光度则是各吸光物质吸光度的总和。其表达式为： 二、郎伯-比尔定律 （二）偏离郎伯-比尔定律的因素 根据郎伯-比尔定律 ,如固定液层厚度l，以吸光度对浓度作图时，应得到一条通过原点的直线。 （二）偏离郎伯-比尔定律的因素 1. 非单色光的影响 在紫外-可见分光光度计中，由于仪器性能的限制，得到的不是严格的单色光。 2. 非均相体系的影响 当样品溶液中含有颗粒等悬浮杂质时，样品为不均匀的体系，光线会出现散射。 （二）偏离郎伯-比尔定律的因素 3. 溶液本身发生化学变化的影响 溶液中待测组分发生了解离、缔合、光化等作用，造成物质光学性质改变，偏离了郎伯-比尔定律 。例如，铬酸盐在溶液中有如下平衡： Cr2O72-呈橙色，而CrO42-呈黄色，两者对不同波长光线的吸收性能完全不同。 （二）偏离郎伯-比尔定律的因素 4. 浓度的限制 朗伯-比尔定律假定吸光质点之间不发生相互作用，因此只有在稀溶液时才基本符合。 浓度较高时，质点之间会互相影响对方的电荷分布，吸光性能发生改变，必然导致偏离郎伯-比尔定律 。 三、吸光系数 吸光系数k的物理意义为：液层厚度为1cm的单位浓度溶液的吸光度，它表示物质对特定波长光的吸收能力。一个物质在一定条件下的吸光系数为定值。通常有两种表示方法： （一）摩尔吸光系数ε 物理意义是指样品浓度为1mol·L-1的溶液置于1cm样品池中，在一定波长下测得的吸光度值。量纲为L·mol-1·cm-1 。 （二）百分吸光系数 物理意义是指溶液浓度在1%（1g/100mL），液层厚度为1cm时，在一定波长下的吸光度值。量纲为100 mL·g-1·cm-1。 百分吸光系数和摩尔吸光系数有如下关系： 三、吸光系数 例4-1 用氯霉素（分子量为323.15）纯品配制100 mL含2.00 mg的溶液，使用1.00 cm的吸收池，在波长为278nm处测得其透射率为24.3%，试计算氯霉素在278 nm波长处的摩尔吸光系数和比吸光系数。 解：已知 λ=278nm M=323.15g/mol c=2.00×10-3% T=24.3% 四、吸收光谱 四、吸收光谱 §4.2 紫外-可见分光光度计 一、基本构造 基本结构由五部分组成 一、基本构造 1.光源 用于提供分析所需的光线 一、基本构造 2.单色器 又称为分光系统，是从复合光中分出单色光的光学装置。有狭缝，透镜，色散元件等部件。其中，色散元件最为重要，常见的有棱镜和光栅 一、基本构造 2.单色器 单色器几大部件的示意图 一、基本构造 3.吸收池 用于盛放溶液的装置。又称比色皿。分为两种材质:石英或者玻璃 一、基本构造 3.吸收池 一、基本构造 4.检测器 把光信号转变为电信号的装置 例如：光电管、灵敏度较高的光电倍增管等； 5.信号处理系统 记录信号并进行处理的装置 例如：连接在仪器上的微型计算机 二、常见紫