虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定.docVIP

虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定 作者：刘仁旺，滕增辉，张邦乐，宦梦蕾，杨茜，周四元 【摘要】 目的：建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法，优化虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取工艺. 方法：采用梯度法建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色谱方法，以白藜芦醇和白藜芦醇苷总量为考察指标，设计以乙醇浓度、溶剂倍数及醇提温度等为影响因素的4因素3水平的正交实验，确定虎杖中上述有效成分的最佳提取工艺. 结果：在选定的色谱条件下，虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷可以达到基线分离. 检测白藜芦醇及其苷的线性回归方程分别为Y=0.0006X-0.183 （r=0.9996），Y=0.0011X-0.478（r=0.9993）；线性范围分别为0.48～38.4 mg/L和0.47～38.2 mg/L. 日内、日间精密度都小于5%，回收率在90%～105%之间，样品分析时间小于7 min. 虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的最佳提取工艺为乙醇浓度80％，溶剂倍数15，醇提温度70℃，提取时间2 h. 结论：建立了准确可靠、分析速度快可同时检测虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷的分析方法，优化了质量可控的提取工艺. 【关键词】 虎杖； 白藜芦醇；白藜芦醇苷；高效液相色谱 0引言 虎杖(polygonum cuspidtum sieb)为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖的干燥根茎，主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份［1］. 白藜芦醇(3,4′,5三羟基二苯乙烯)和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分，具有保护心脏、抗血栓、降血脂［2］等药理作用. 白藜芦醇及白藜芦醇苷的药理作用相近，但其极性却相差较大. 本研究探讨一种兼顾白藜芦醇及白藜芦醇苷的提取工艺，并建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），旨在为虎杖的药理作用研究以及科学合理利用提供试验依据. 1材料和方法 1.1材料白藜芦醇苷和白藜芦醇的对照品均由中国药品生物制品检定所提供；虎杖的干药材购自西安市胡家庙药材市场. 2695型高效液相色谱仪，2996型二极管阵列检测器(美国Waters公司)；调温式电热套(北京科伟永兴仪器有限公司)；色谱纯乙腈，甲醇(美国TEDIA公司)，其他试剂均为国产分析纯. 1.2方法 1.2.1工作曲线的建立分别精密称取白藜芦醇苷及白藜芦醇对照品10 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成100 mg/L的白藜芦醇苷和白藜芦醇对照品混合储备液，备用. 分别精密吸取两对照品储备溶液0.05，0.2，1，2, 4 mL 配制成浓度为0.5，2，10，20, 40 mg/L的混合对照品的标准溶液，依次取20 μL进样. 色谱条件为：色谱分析柱：C18(250 mm×4.6 mm，5 μm，美国Phenomenix公司)；流动相：乙腈和水，梯度洗脱如表1所示. 检测波长：315 nm；流速：1 mL/min；柱温为30℃. 按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度值为横坐标绘制工作曲线，应用Excel软件采用最小二乘法计算回归方程. 表1HPLC流动相梯度表 时间(min)〖〗乙腈(％)〖〗水(％)〖〗流速(mL/min)〖〗梯度类型0〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗67〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗69〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗620〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗1 1.2.2精密度和准确度测定分别精密吸取白藜芦醇及白藜芦醇苷储备液0.1，0.5，3 mL，配成浓度为1，5，30 mg/L混合对照品的标准溶液. 每个浓度6个样本，连续测定3 d，与标准曲线的建立同时进行. 代入当日的回归方程计算标准溶液的浓度，将结果进行方差分析，即得到本方法的精密度. 将1，5，30 mg/L三个浓度标准溶液的白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定浓度值与标准溶液的标示浓度相比，即得方法回收率. 1.2.3虎杖有效成分提取工艺的优化在本生产工艺研究中，根据药物有效成分、药理作用及理化性质特点，选择醇提法进行正交试验，以提取时间（A 1,2,3 h），乙醇浓度（B 70%,80%,90%），醇提温度（C 50,60,70 ℃）和溶剂倍数(D 10,15,20)作为考察因素，选择3个水平，综合评价提取工艺, 选用L9(34)正交表，安排正交实验. 取虎杖10 g，按L9(34)正交表设计的顺序，各加入设定的乙醇量，加热煎煮规定时间和次数，滤过，合并滤液，将滤液用甲醇稀释10倍后取样20 μ