微生物的生长重点.ppt

一、实验室培养法 （一）固体培养法 1. 好氧菌的固体培养 试管斜面、培养皿琼脂平板 克氏扁瓶、茄子瓶 1. 固体培养基 (1)平板培养 菌落： 单个细胞在固 体培养基表面 经过培养形成 肉眼可见的微 生物集团。 (2)斜面培养 菌苔： 微生物密集 生长所形成 的。其作用是 可用来保存菌 种。 (3)稳定期（ stationary phase): 2. 特点:细胞的菌体形态典型， 芽孢形 成 ，细胞 内 开 始 贮藏物质。 细菌纯培养群体生长测定 1.现象：活菌数目不增不 减，生长速率趋于0,曲 线有一下降的趋势。 细菌纯培养群体生长测定 3.出现原因： 1）营养物质大量消耗； 2）有毒代谢产物大量积累； 3) 营养物比例失调 4）外界条件影响（pH、高细胞浓度，氧化还原电位等） 4. 意义： 1）发酵生产形成的重要时期（抗生素、氨基酸等）， 生产上应尽量延长此期，提高产量，措施如下： ? ? ? 补充营养物质（补料） 调pH 调整温度 2）稳定期细胞数目及产物积累达到最高。 3）产量常数： 概念：表示微生物对基质利用效率的高低 Y=菌体干重/消耗营养物质的浓度 根据产量常数可确定微生物对营养物质的需要量 如：Y=0.5，表示要得到5g菌体，需某营养物（葡萄 糖）10g。 细菌纯培养群体生长测定 （ 4）衰亡期 1.现象：细胞死亡速率生长 速率。一般总菌数不变,活菌 数曲线下降。 2. 特点：菌体 变形 ，大小 不一，细胞出现自溶,生理代 谢活动停滞。 细菌纯培养群体生长测定 （二）按照菌体与代谢产物分 1. 菌体生长期 指数期为主 2. 代谢产物合成期 以稳定期为主 五、连续培养 （一）按控制方式分 1. 恒浊培养 连续培养 概念：在恒浊器内，调节培养 基流速，使细菌培养液浊度保持 恒定的连续培养方法。 原理：维持菌浓度不变。 特点：基质过量，菌以最高速率 生长；但工艺复杂，烦琐。以获 得菌体或与菌体生长相平行的代 谢产物 2. 恒化培养 概念：以恒定流速使营养物质浓 度恒定而保持细菌生长速率恒定 的方法。 原理：恒化器中动态平衡的稳定 性，是以某种生长限制因子（如 碳、氮源；生长因子；无机盐 等）的浓度来控制菌的生长速 度。 特点：维持营养成分的低浓度， 控制微生物生长速率。主要用于 科学研究 连续培养 连续培养的优点 1、缩短发酵周期，提高设备的利用率； 2、便于自控。降低动力消耗及劳动强度； 3、产品均一； 4、节约资源 连续培养 连续培养的缺点 易杂菌污染；菌种易退化;营养物利用率低 (二)按培养器级数分 1. 单级连续培养 微生物代谢产物的产生速率与菌体生长速 率相平行 2. 多级连续培养 微生物代谢产物不与菌体生长速率相平行 六、同步生长 同步生长： 同步培养法：能获得处于同一生长阶段 的群体细胞的培养方法 同步生长：运用同步培养技术，控制微 生物生长，使之处于同一生长 阶段并同时分裂。 同步生长 获得同步生长的方法： 1. 机械法— 收集同样大小的细胞 密度梯度离心： 选择性滤膜法: 2. 调整生理条件法： 温度、光、限制因子等 例 ： 温 度 开 始 很 低 ，使 其 均处 在 仅活着的状态—— 升高温度—— 同步生长 ３. 抑制ＤＮＡ生长法： 加入代谢抑制剂，阻遏DNA 复制——解阻遏——同步 同步生长 七、微生物的高密度培养 High cell-density culture, HCDC 一般指微生物在液体培养中细胞群体密度 超过常规培养10倍以上时的生长状态或 培养技术 特点（1）产品产值高 （2）提高下游工程的效率 （3）生产成本相对降低 HCDC中注意的问题 ? ? ? ? 选取最佳培养基成分和各成分含量 补料：逐量流加 提高溶解氧的浓度 防止有害代谢产物的生成 影响微生物生长的 主要因素 第二节 一、温度 1）~ 不等于积累代谢产物的最佳温度； 2）同类型发酵使用菌种不同，~ 不同； 3）同一微生物不同生理活动的~ 不同。 理化因素的影响—温度 （一）三种基本温度 （生长温度三基点） 最低生长温度：微生物生长的最低温度下限； 最高生长温度：微生物生长的最高温度； 最适生长温度：微生物生长最快时的温度 （二）按最适生长温度将微生物分类： 低温微生物（＜ 20℃） 中温微生物（20℃～45℃ ) 高温微生物（＞45℃） 理化因素的影响—温度 1、低温微生物： 生长机理： ?细胞内的酶促反应在低温下进行，温 度高（30-40℃） ，酶失活。 ?胞膜中不饱和脂肪酸的含量高，故低 温下膜的流动性较好。 理化因素的影响—温度 2、中温微生物： 大多数微生物属此类（20-45 ℃）