废水培养微生物絮凝剂1..docVIP

利用废水生产微生物絮凝剂的研究摘 要：6株具有较高絮凝活性的菌种，以啤酒废水为廉价培养基培养，用以降低成本。通过改变废水预处理方法以及在废水中添加各种碳、氮源及无机盐等因子进行实验。实验结果表明，最佳絮凝剂产生菌为Y1，其最佳培养条件为：对啤酒废水高温灭菌，添加KH2PO4为2g/l，调pH为7.5-8.0，培养温度30℃、摇床转速180rpm、培养24h，在这样的条件下，Y1菌种所产的絮凝剂对高岭土悬浊液絮凝率达到90%以上，同发酵培养基的发酵液相比絮凝率相差无几，结果说明利用啤酒酵母废水来培养微生物产絮凝剂是可行的，也是经济的。 关键词：微生物絮凝剂 培养条件 啤酒废水 1.前言 1.1概论 随着我国社会工业化的发展，虽然带动了经济的发展，但是引起了各种棘手的环境问题。特别突出的是，最近几年来水污染现象极为严重，已经严重危害人类健康及发展。因此，污水处理受到了社会各界的高度关注。由絮凝微生物生长过程中所产生的一种代谢产物，具有絮凝活性的高分子化合物，可以良好的沉淀、聚集污水中的金属离子、悬浮颗粒、以及色素等有机物质，效果佳、具有生物降解特性，于环境和人类无毒害作用，亦不会二次污染。 微生物絮凝剂是由微生物在生长过程中产生的具有絮凝活性的细胞代谢产物[1]。化学为多糖、糖蛋白、蛋白质DNA等[2]。 目前微生物絮凝剂的研究以及应用依然处在实验室中研究阶段，用于实际工业的仍然是少数的，主要是因为用于生产微生物絮凝剂的培养基成本较高，难以大量培养。培养基中主要成分是碳源、氮源和无机盐等，而实际生活和工业生产中所排放的各种污水废水中主要的污染成分就是各种营养物质，碳氮源含量丰富。因此，可以利用污水作为基础培养基通过添加少量无机盐等来培养产絮凝剂微生物用以生产微生物絮凝剂，这样不仅能解决培养基成本过高问题，同时还能降低废水中的污染物，达到以废治废，废水资源化利用的双重目的[3] [10]。 1.2微生物絮凝剂进展以及研究 1.2.1微生物絮凝剂的进展 美国科学家Butterfield在1935年从活性污泥中发现并筛选出来的菌胶团产生菌是最早发现的絮凝微生物[4]。1976年，J.Naknmura等从酵母菌、细菌、放线菌等214株菌株中筛选出19种具有絮凝能力的菌株。1997年suh.H-H等人发现了DP-152絮凝剂，这是首次发现杆状细菌也能产生絮凝剂[5-7]。 此后，英国、美国、德国、韩国、伊朗、日本、朝鲜等国的科学研究者对絮凝微生物以及絮凝剂投入了大量研究，并且已经取得了相应的成果。我国对微生物絮凝剂的研究是从90年代才刚刚起步的，中科院成都研究所张本兰从活性污泥中筛选得到P.alcaligenes8724菌株能产絮凝剂；邓述波等人从土壤中分离筛选得到了硅酸盐芽孢杆菌的新变种，该菌可以产生絮凝剂MBFA9，这些絮凝剂在水处理中都有一定的作用[6-9] 微生物絮凝剂有着非常广泛的应用前景，微生物絮凝剂对混浊液絮凝效果好，作用迅速、用量也少，同时具有良好的去色效果。但是微生物剂依然处于无法大批量生产的阶段。所以降低微生物絮凝剂的生产成本，优化微生物絮凝剂产生菌的培养条件是工业化大量生产的关键点[11]。 1.2.2微生物絮凝剂的作用机理 微生物絮凝剂是生物大分子物质，其化学组成为多糖、糖蛋白、蛋白质、纤维素、DNA等2 材料与方法 Y1、C2、A3、F4、M10、M15Y1、C2、A3、F4、M10、M15①活化培养基（g/L）：称量氯化钠5，牛肉膏3，琼脂18，0，并调pH7.0～7.2 ②斜面培养基：与活化培养基一样。 ③摇瓶发酵培养基（g/L）：葡萄糖20，磷酸氢二钾5，磷酸二氢钾2，氯化钠0.1，硫酸铵0.2，尿素0.5，酵母膏0.5，硫酸镁0.2，112度灭菌20min。 ④废水培养基：取啤酒发酵后排酵母废水，稀释10倍，加入磷酸二氢钾（2g/L），葡萄糖（10g/l），尿素（1g/l）。 将上述培养基均调节pH至7.5～8.0，112℃、20min高压蒸汽灭菌。 2.2.2实验器材 三角瓶、烧杯、量筒、移液管、电子天平、培养皿、试管、涂布棒、接种环 紫外可见分光光度计(752N, 上海佑科)、 高压蒸汽灭菌锅（LDZX-75KBS，上海申安）、 垂直净化工作台（SD-DJ，上海浦东伟普净化设备厂）、 电热恒温培养箱（DHP-9272，上海一恒科技有限公司）。 2.3絮凝率的测定方法 CaCl2溶液：1g无水氯化钙，100mL蒸馏水。 高岭土溶液：4g高岭土，1000mL蒸馏水。 测定每个样品时，分别取高岭土悬液、氯化钙水溶液各10ml 、0.5ml，很合均匀，从中取9.8ml，再取0.2ml发酵液加入小烧杯中，对照不加发酵液。用PH计在小烧杯中调节PH值到7.5-8.0，在此过程中充分混匀，倒入试管中