间接免疫光实验.pptVIP

间接免疫荧光实验 实验原理 固定在载片上的灵长类肝组织和HEp-2细胞与适当稀释的待检血清反应后,如果待检血清中有ANA,就会与细胞核成分特异结合,加入FITC标记的的羊抗人IgG抗体又可与ANA结合,在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。 试剂与器材 1.抗原片 2.荧光标记的二抗 3.PBS-Tween缓冲液 4.阴、阳性参考血清 5.封片介质:磷酸盐缓冲甘油 6.盖玻片 7.器材:荧光显微镜、摇床、脱色缸、吸管、 试管等 滴定平板技术： 使实验操作标准化 荧光二抗 荧光显微镜： IIF操作步骤 １．准备：检查加样板是否反应区亲水而周边疏水。从试剂盒中取出载片，等平衡到室温时方可打开包装。注意不要触及生物薄片。用笔编号、标记。 ２．稀释：用磷酸盐缓冲液1:100稀释血清。注意：阳性和阴性对照不需稀释，使用前要混匀 ３．加样：将加样板放在泡沫板上，按顺序分别滴加25ul稀释后的血清至加样板的反应区中，避免产生气泡。滴加完所有待测标本后才开始温育。 ４．第一次温育：将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里，反应立即开始。确保每一个标本均与生物薄片接触，且标本间互不接触。室温温育30分钟。 ５．清洗：用磷酸盐缓冲液流水冲洗载片1秒钟（注意水流不要太急，不要直接对着基质冲），然后立即将其浸入装有磷酸盐缓冲液的脱色缸中浸洗5分钟。 ６．加样：滴