肾移植术后巨细胞病毒感染早期检测方法.docVIP

肾移植术后巨细胞病毒感染早期检测方法 摘要】 肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染具有较高的发病率和病死率，早期准确的检测有利于临床治疗，本文就CMV感染的检测方法尤其是感染早期的几种诊断方法进行阐述。 【关键词】 肾移植；巨细胞病毒；检测方法 　　巨细胞病毒(CMV)感染是肾移植术后的常见并发症，据文献报道CMV活动性感染率在肾移植术患者中约50%～75%,有10%～30%的患者为有症状的CMV感染。一旦发生严重的CMV感染,特别是间质性肺炎,病死率高达25%［1］。在移植术后,随着各种免疫抑制剂的应用,病毒将被激活。在肾移植受体中,CMV感染的临床发病率与供体和受体移植前的血清学状态以及所用免疫抑制剂的种类和剂量有关。受体CMV阳性R+/供体CMV阴性D，为继发性感染，症状较轻；如果由于供体肾及术后使用血液制品CMV阳性，即R/D+，为原发性感染,病情最为严重；若为重复感染,即R+/D+，病情较重［2］。有文献报道术前供、受体CMV血清反应均为阳性时,术后患者发生临床CMV感染的概率可达50%,供体阳性、受体阴性时术后CMV病的发生率近66%,因此而造成的CMV病、移植物丧失及医疗花费都比其他因素的大［3］。急行排斥反应和免疫抑制剂的使用是CMV 感染最主要的诱发因素［4］,抗淋巴细胞球蛋白(ALG)，OKT3及细胞毒性药物能直接促使潜伏的病毒活化，而环孢素A、FK 506及糖皮质激素能够抑制机体的免疫系统,导致病毒感染的播散与迁延,进一步加重病情，其中多克隆或单克隆抗淋巴细胞抗体刺激CMV感染的效应最强,成为影响移植术后CMV感染发生的重要因素。因此早期诊断和及时预防性抗病毒治疗是降低移植术后CMV病发病率和病死率的关键。CMV感染的症状常表现为不明原因的发热，伴有白细胞减少或淋巴细胞增多、血小板减少、肌肉痛、关节痛和胃纳差等，当发展为CMV病时，常引起间质性肺炎，表现为干咳和呼吸困难，严重者可发生急性呼吸衰竭。此外，还可引起脑炎、肝炎、胃肠炎、急性视网膜炎、消化道溃疡等。 　　1 CMV感染的检测方法 　　1.1 一般检查 外周血白细胞减少或淋巴细胞增多，血小板减少；尿常规可发现蛋白尿，并有少量红细胞、白细胞，可有ALT和胆红素升高，肺部X线检查：双下肺炎症改变。 　　1.2 组织学检查 病毒分离培养，取尿、血、咽拭子、支气管肺泡灌洗液及组织标本直接培养，病毒培养敏感性低，耗时常需要3周～6周时间出结果，不利于指导临床用药。组织学检查找巨形细胞,一般在严重原发性感染时更有意义。 　　1.3 血清学检查 包括CMV抗体检查，CMV抗原血症测定法，CMV多聚酶链测定法和PP 67mRNA的监测。现就血清学检查的具体方法介绍如下。 　　1.3.1 CMV抗体检查 采用ELISA法测定血清中CMV IgM、IgG。抗CMV抗体血清学检查方法简单，但CMVIgM在原发性感染早期不出现，CMVIgG在继发性感染中需升高4倍才有意义。由于肾移植患者术后常规使用免疫抑制剂，CMV抗体产生常延迟或缺乏，影响阳性检出率。一般用于监测移植前供、患者的CMV携带状况。 　　1.3.2 CMV抗原血症测定法 机体感染CMV后可在外周血白细胞中检测到CMV抗原，成为CMV抗原血症,CMV 抗原血症的出现明显早于临床症状的出现和血清学的改变。CMVPP 65抗原检测可以早期诊断CMV感染，已成为国际公认的监测HCMV活动性感染的“标准方法”之一［6］。CMVPP 65抗原是CMVUL 83基因编码的早期即刻蛋白(IEA)，在CMVDNA复制前就有合成，对CMV的复制具有调控作用,是体内早期活动性CMV病毒复制的标志［6，7］。CMV抗原血症测定法计数阳性细胞，根据已制定的参数标准来决定是否采取抗病毒治疗。通常通过免疫组织化学染色法(即标记链丝菌素生物素结合法，LSAB法)检测外周血白细胞CMV抗原，该方法可以避免用ABC法导致内源性过氧化物酶的非特异性染色而呈现假阳性的结果，而且用普通显微镜即可作出诊断。在普通光学显微镜下观察并计数5万个白细胞中CMV阳性细胞个数(称抗原指数)。阳性细胞在镜下细胞核为黄色或棕黄色，阴性细胞核为蓝色或蓝紫色。测定CMVPP 65抗原敏感性及特异性均高，达90％以上，但是CMV抗原血症测定法的缺点是需要新鲜血标本(标本必须在8 h内及时处理),来获得最佳敏感性，否则PP 65阳性细胞数将会减少,试验的敏感性将会降低。 　　1.3.3 CMV多聚酶链测定法 用多聚酶链反应(PCR)来扩增DNA被证实是检查临床标本CMV感染的可靠方法。通常有定性PCR技术和定量PCR技术。 　　1.3.3.1 定性PCR 定性