(生化习题及大纲.doc

习题 2–1．图2—1的滴定曲线描述了谷氨酸的电离。请回答下列问题：指出三个pK’a的位置；指出Glu－和Giu＝各一半时的pH；指出谷氨酸总是带净正电荷的pH范围；指出Glu±和Glu－能作为一种缓冲液的共轭酸碱对的pH范围. 图2-1 谷氨酸的酸-碱滴定曲线 ? 2–2．为什么甘氨酸处在等电点时是以偶极离子的形式存在，而不是以完全不带电荷的形式存在？处在等电点时，其完全不带电荷的形式是多少? ? 2–3．甘氨酸是乙酸甲基上的氢被氨基取代生成的，但是，甘氨酸羧基的pK’a值比乙酸羧基 pK’a低。为什么? ? 2–4．在pH9.0时，计算赖氨酸的两性离子、阳离子以及阴离子所占的比例。已知赖氨酸三个可电离基团α-COOH，α–NH3+和ε- NH3+的pK’a值分别为2.18、8.95和10.53。 ? 2–5．用强酸型阳离子交换树脂分离下述每对氨基酸，当用pH7.0的缓冲液洗脱时，下述每对中先从柱上洗脱下来的是哪种氨基酸? 天冬氨酸和赖氨酸；精氨酸和甲硫氨酸；谷氨酸和缬氨酸;甘氨酸和亮氨酸；丝氨酸和丙氨酸。 ? 2–6．计算出由Ala、Gly、His、Lys和Val所构成的可能的五肽数目。 ? 2–7．在大多数氨基酸中，α–COOH的pK’a值都接近2.0，α–NH3＋的pK’a值都接近9.0。但是，在肽中，α–COOH的pK’a值为3.8，而α–NH3＋的pK’a比值为7.8。你能解释这种差别吗? ?2–8．某蛋白质用凝胶过滤法测定的表观分子量是90kD；用SDS测定时，它的表观分子量是60kD，无论2-巯基乙醇是否存在。哪种测定方法更准确？为什么？ ? 2–9．一种分子量为24,000、pI为5.5的酶被一种分子量类似、但pI为7.0的蛋白质和另外一种分子量为100,000、pI为5.4的蛋白质污染。提出一种纯化该酶的方案。 ? 2–10．下面的数据是从一个八肽降解和分析得到的，其组成是：Ala、Gly2、Lys、Met、Ser，Thr、Tyr。该八肽 用CNBr处理，得到：Ala、Gly、Lys、Thr； Gly、Met、Ser、Tyr 用胰蛋白酶处理，得到：Ala、Gly； Gly、Lys、Met、Ser、Thr、Tyr 用糜蛋白酶处理，得到：Gly、Tyr； Ala、Gly、Lys、Met、Ser、Thr 经分析，N–末端残基是：Gly C–末端残基是：Gly 请确定该肽的氨基酸顺序。 解答： 2–1解答: 三个pK’a的位置如图2—4所示 图2–4 谷氨酸的酸-碱滴定曲线显示出它的三个 pK’a的位置以及它在不同pH下的电离状态 Glu－和Glu＝各一半的pH值为9．67。 当pH小于3.22时，谷氨酸总是带净正电荷。 Glu±和Glu－作为一种缓冲液的共轭酸碱对的pH范围是pH4.25左右 ? 2–2解答：因为羧基的酸性(pK’a=2.36)比质子化的氨基的酸性强得多(pK’a=9.60)。因此，羧基将倾向于供出质子使氨基质子化，并且其平衡常数是107。这表明平衡状态非常强烈地偏向右边： 因甘氨酸的等电点是5.97，首先我们需要测定甘氨酸处在等电点时〔–COO－〕/〔–COOH〕和〔H3+N–〕/〔–NH2〕的比例。如果我们单独处理每个功能基团，并利用Henderson—Hass- elbalch方程，就会得到： 两者合并起来考虑时，两性离子与完全不带电荷的比例是： 因此，甘氨酸处在等电点时，大约1／107以不带电荷的形式存在的。 ?2–3解答：甘氨酸羧基的pK’a值为2.34，乙酸羧基的pK’a值是4.7。当甘氨酸溶液的pH值低于6.0时，氨基以正电荷的形式存在。这种正电荷通过静电相互作用使带负电荷的羧基离子稳定。这就意味着甘氨酸的羧基将比较容易失去它的质子，因而它是一种更强的酸(具有更低的 pK’a值)。 ?2–4解答：赖氨酸有三个可电离的质子： ? [Lys±]＝1.12[Lys＋]＝1.12×46.45＝52 由此可见，在pH9.0时，〔Lys＋＋〕含量甚微，可以忽略不计，〔Lys＋〕占46.45％，〔Lys＋－〕为52％，〔Lys－〕为1.53％，整个分子带部分正电荷。 ?2–5解答：氨基酸从离子交换柱上被洗脱下来的速度主要受两种因素的影响：带负电荷的树脂磺酸基和氨基酸带正电荷的功能基团之间的离子吸附，吸附力大的在树脂上停滞的时间长，从柱上洗脱下来的速度慢；氨基酸的侧链基团与树脂强非极性的骨架之间的疏水相互作用。非极性大的侧链R基氨基酸与树脂骨架间的疏水作用力强，从树脂柱上洗脱下来的速度慢。 根据氨基酸可电离基团的