检测牛奶中痕量的四环素用高效液相结合选择性分子印迹固相萃取.docVIP

四环素表面分子印迹材料的制备及其应用研究 牛玉玲，刘从安，马梅花，龚艳茹，王玥，龚波林* （宁夏大学化学化工学院，银川750021） 摘要 用γ-（）MPS）修饰硅胶，然后将功能单体α-甲基丙烯酸（MAA）接枝到改性硅胶表面，以四环素为模板分子，乙二醇二缩水甘油醚（EGDE）为交联剂，在50%（甲醇：乙腈=6：7，v/v）水溶液中制备了四环素表面分子印迹材料。采用静态和动态方法研究了该印迹材料的吸附性能，经过Scatchard模型分析，计算得到两类结合位点。同时建立了四环素-固相萃取-高效液相色谱法快速检测牛奶中四环素残留量的分析方法。结果表明，四环素浓度在150~950 μg/L范围内线性关系良好，相关系数为0.9972；添加水平为300~700 μg/L分子印迹固相萃取柱对模板分子四环素的平均加标回收率为81.1%，相对标准偏差在 3.0 % ~4.4 %，方法的检出限为25 μg/L。该方法简单、高效，可用于牛奶样品中对四环素的富集和检测。 关键词 表面分子印迹，四环素，固相萃取，牛奶样品 1 引 言 四环素是一类广谱类抗生素广泛应用于动物病菌类疾病的预防和治疗。由于四环素类抗生素母体化学结构稳定，畜禽生产中所使用的四环素大部分以原药或代谢物的形式排泄到水体及土壤后不易分解，从而直接污染环境并可诱导耐药菌产生。高含量的四环素残留在可食用性动物组织如牛奶、肉、TCs）残留的检测十分关注。我国和欧盟明确规定：牛奶和肌肉组织中TCs总含量不得超过100 μg/kg，鸡蛋中为200 μg/kg[1]。TCs分析常用的检测方法有高效液相色谱[2]、毛细管电泳[3]、微生物法[4]、酶联免疫法[5]、电化学分析[6]、化学发光及联用技术[7]等。在这些方法中，微生物法测定所需时间长、缺乏专一性，酶联免疫法价格比较昂贵，而化学-物理方法需要复杂的样品前处理过程。因此，需要发展一种简便，灵敏和具有选择性的方法来检测食品中的痕量四环素含量。 分子印迹技术（Molecular Imprinting Technology，MIT）[8]是制备对某一特定的目标分子具有特异识别性的聚合物的技术，分子印迹聚合物具有特异性和选择性以及热、、、.1 试剂与仪器 试剂：硅胶（200-300目，青岛海洋化工厂）；γ-（甲基丙烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷（MPS，分析纯，成都格雷西亚化学试剂有限公司）；过硫酸铵、α-甲基丙烯酸（MAA，分析纯，Sigma 公司）；四环素（tetracycline, TC）oxytetracycline, OTC）、金霉素（chlortetracycline, CTC）；乙二醇二缩水甘油醚（EGDE，分析纯，西亚试剂）；甲醇、乙腈（色谱纯，Tedia Company Fairfield，USALC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），KQ-3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；TGL-20M高速台式离心机（长沙湘仪离心机有限公司）；BS 224S型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；JSM-7500F型电子扫描显微镜（日本电子公司）；VarioEL Ⅲ型元素分析仪（德国艾乐曼元素分析公司）。 色谱条件: C18反相色谱柱（150 mm × 4.6 mm，μL。 2.2 四环素分子印迹聚合物的制备 2.2.1 活化的硅胶表面键合含有双键的硅烷化试剂 取2.0 g活化后的硅胶（120~160目）于250 mL圆底烧瓶内，加入100 mL 50%(V/V)乙醇，搅匀，加入2.5 mL MPS，再加3滴吡啶于50 ℃反应24 h，用无水乙醇抽滤24 h，以除去体系中未反应的硅烷化试剂，真空干燥，得到改性硅胶微粒MPS/SiO2。 2.2.2 改性硅胶表面化学接枝聚甲基丙烯酸 取2.0 g改性硅胶微粒（MPS/SiO2）加入到有150 mL水的圆底烧瓶内搅匀，再加入7 mL α-甲基丙烯酸(MAA)，通氮气30 min，同时不断搅拌，使改性硅胶微粒充分分散，升温至70 ℃加入0.042 g的过硫酸铵(NH4)2S2O8 作为引发剂，在70 ℃下搅拌接枝聚合反应24 h，抽滤；用无水乙醇抽提24 h，除去吸附在微粒表面的聚合物，然后真空干燥，得到接枝微粒MAA/SiO2。 2.2.3 接枝硅胶微粒表面四环素分子印迹聚合物的制备 准确称取2.0 g MAA/SiO2接枝硅胶于10 mmol/L 50 mL(甲醇：乙腈=6：7，v/v)四环素溶液中，恒温振荡6 h，使MAA/SiO2对四环素的吸附达到饱和，滤出微粒，真空干燥。取2 g饱和吸附了四环素的接枝微粒于50mL 4 mm