调控脂肪间充质干细胞成软骨分化基因Sox-9和低氧诱导因子1α的表达.docVIP

调控脂肪间充质干细胞成软骨分化基因Sox-9和低氧诱导因子1α的表达 张传辉1，李建军2，杨 军2(1朝阳市中心医院骨外科，辽宁省朝阳市 122000；2中国医科大学附属盛京医院创伤骨科，辽宁省沈阳市 110004) 引用本文：张传辉，李建军，杨军. 调控脂肪间充质干细胞成软骨分化基因Sox-9和低氧诱导因子1α的表达DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.45.012 ORCID: 0000-0002-4742-2150(张传辉) 文章快速阅读： 文题释义： 转染：指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。 SOX9：研究人员发现基因SOX9是一种与FOXL2基因保持着排斥关系。当一种基因启动，另一种则自动关闭。SOX9基因通常只在男性体内活动，当男性的SOX9一旦被开启，FOXL2的活动就遭抑制，并进而终身停顿。这种情况在女性体内刚好相反，FOXL2会最先被启动。学界普遍了解FOXL2对女性维持女性特征与卵巢的成长十分重要，然而科学家并不预期卵巢中的排卵细胞会被SOX9基因吸收，进而发挥男性生育功能。 摘要 背景：有学者采用基因转染的方法诱导脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化，使种子细胞能够稳定合成和分泌特定的细胞因子，从而达到长期稳定刺激种子细胞增殖、分化和软骨形成的目的。 目的：观察胰岛素样生长因子1基因转染对兔脂肪间充质干细胞低氧诱导因子1α和Sox-9表达的影响。 方法：①取成年新西兰大耳白兔颈后部皮下脂肪组织，分离、培养兔脂肪间充质干细胞，免疫荧光法鉴定后在脂质体介导下应用pcDNA3.1-IGF-1基因转染脂肪间充质干细胞，G418筛选，获得稳定转染的细胞株；②实验分为3组：正常传代培养的脂肪间充质干细胞；转染pcDNA3.1的脂肪间充质干细胞；转染pcDNA3.1-IGF-1的脂肪间充质干细胞。③RT-PCR及Western blot法检测转染后细胞中胰岛素样生长因子1的表达，MTT法绘制细胞增殖曲线，Dil荧光染料标记后计数细胞增殖效率，免疫荧光法分析转染后细胞低氧诱导因子1α和Sox-9的表达情况，DMMB定量测定总糖胺聚糖含量。 结果与结论：①成功构建稳定表达pcDNA3.1-IGF-1的细胞株，RT-PCR及Western blot检测证实转染后的细胞株在mRNA水平上获得胰岛素样生长因子1的表达，并且成功翻译为蛋白；②MTT提示转染后细胞增殖活性增强；③胰岛素样生长因子1基因转染显著提高Dil标记脂肪间充质干细胞的增殖效率；④转染后细胞的低氧诱导因子1α和Sox-9表达阳性；⑤胰岛素样生长因子1基因转染组糖胺聚糖 含量明显高于其他2组(P 0.01)。结果说明，胰岛素样生长因子1基因转染能够能够有效促进脂导因子1α和成软OX-9；辽宁省自然科学基金 主题词： 干细胞；间充质干细胞；胰岛素样生长因子I；组织工程 基金资助： 辽宁省自然科学基金资助项目 Regulation of Sox-9 and hypoxia-inducible factor-1alpha in adipose-derived mesenchymal stem cells Zhang Chuan-hui1, Li Jian-jun2, Yang Jun2 (1Department of Orthopedics, Chaoyang Central Hospital, Chaoyang 122000, Liaoning Province, China; 2Department of Orthopedic Trauma, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110004, Liaoning Province, China) Abstract BACKGROUND: Gene transfection of adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSCs) can stably synthesize seed cells that secrete specific cytokines, thereby achieving long-term stable proliferation, differentiation and chondrogenic differe