饮用水微生物检验操作规程.docVIP

郑州贝斯达医疗器械有限公司 文件编号: B3-23-3-** 版 本 号: 1.0 生效日期: 2012.12.1 页 码: 第1页 共4页 饮用水微生物检验操作规程 目的 本SOP制订用水的微生物检测检验操作规程。 职责 实验室管理人员负责确保实验室人员接受该规程的正确培训并执行该规程。相关实验室人员负责正确执行下述规程。 定义 微生物限度检查包括细菌检查 程序/范围 仪器 名称 型号与规格 生产厂家SW-CJ-1F 苏州安泰空气技术有限公司 SW-CJ-2FD 苏州安泰空气技术有限公司 干热消毒箱 GRX-6 上海精宏实验设备有限公司 生化培养箱DPN-9082 太仓精宏仪器设备有限公司 电热恒温水浴锅 DZKW-4 电子天平 HZK-FA210 微生物限度检验仪HTY-100 杭州泰林生物技术设备有限公司 培养基和缓冲液PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液营养琼脂培养基胆盐乳糖培养基MUG培养基麦康凯琼脂培养基 郑州贝斯达医疗器械有限公司 文件编号: B3-23-3-** 版 本 号: 1.0 生效日期: 2012.12.1 页 码: 第2页 共4页 饮用水微生物检验操作规程 器具 名称 规格螺旋盖瓶 250ml，500ml 刻度吸管 10ml,1ml 微生物限度过滤培养器 S60 烧杯 500ml,1000ml，2000ml 吸耳球 —— 牛皮纸 —— 灭菌培养皿 Ф90mm 培养基和缓冲液的配制 PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 称取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液16.09 g放入装有1 L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121 ℃高压灭菌15分钟。 营养琼脂培养基 称取营养琼脂培养基33 g放入装有1 L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121 ℃高压灭菌15分钟。 胆盐乳糖培养基称取胆盐乳糖培养基35.8g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121℃高压灭菌20分钟。 MUG培养基 称取MUG培养基23.4g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，115℃高压灭菌20分钟。 靛基质试液 取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。 称取麦康凯琼脂培养基55g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121℃高压灭菌15分钟。 文件编号: B3-23-3-** 版 本 号: 1.0 生效日期: 2012.12.1 页 码: 第 饮用水微生物检验操作规程 E． 操作程序 1.一般细菌的检验方法 a.取10 mL饮用水，置90的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，摇匀，以无菌操作将水倒进无菌玻璃过滤杯中，打开真空泵进行过滤或者将倒进HTY-100微生物限度检验仪中过滤。待样品经薄膜全部过滤完后, 滤膜分别菌面朝上贴于营养琼脂培养基平皿上，取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液替代样品同法操作,做为阴性对照培养：细菌（营养琼脂培养基平皿）于30-35 ℃培养箱培养天 c. 标准：细菌每不得过 100。 大肠埃希菌检查方法 增菌培养：供试品：取10ml接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时阳性对照：取10ml和1ml（10～100cfu）大肠埃希菌接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时。 阴性对照：取PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时。 进一步培养：取上述供试品、阳性对照、阴性对照的培养物0.2ml，接种至含5mlMUG培养基的试管内，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。30-35℃培养箱培养。 于5、24小时在365nm紫外灯下观察，若MUG管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。 观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液。液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。 判定：如MUG阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌;如MUG阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。 如MUG阳性、靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。 若平板上无菌落生长或生长的菌落与下表所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。若平