工具酶课件 3.1.pptVIP

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  • 2017-01-31 发布于北京
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大肠杆菌DNA聚合酶I 的性质 纯化的DNA pol I由一条多肽链组成,约含1000个氨基酸残基,分子质量为109kD。每个大肠杆菌细胞中含有400个分子,在37℃条件下每分钟能催化667个核苷酸掺入正在生长的DNA链。 DNA pol I在空间结构上近似球体,直径约65?(1?=10-10m)。在酶的纵轴上有一个约20?的深沟(cleft),带有正电荷,这是该酶的活性中心位置。 大肠杆菌DNA聚合酶I (E.Coli DNA pol I)是Kornberg A. 1956年首先从大肠杆菌E.Coli 细胞中分离出来的。它是一种多功能性的酶,包括 3种不同的酶活力: 5′- 3′聚合酶活性 以双链DNA为模板,催化单核苷酸结合到引物的3′末端,并不断延伸。 5′- 3′外切酶活性 将双链DNA中游离的5′末端逐个切去。 3′ - 5′外切酶活性 将游离的双链或单链DNA的3′端降解。不过对于双链的降解可被5′-3′的多聚活性所抑制。 5′ CCG 3′ GGCTATCGGA CCG GGCTATCGGA Pol I + Mg2+ A T A G CCT 5′ CCGATAGCCT 3′ GGCTATCGGA 5′ CCGATAGCCT 3′ GGCTA CCGATAGCCT GGCTATCGGA Pol I + Mg2+ CCGATAGCCT

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