生殖器疱疹和尖锐1__培训课件.pptVIP

先用浸透蒸馏水或生理盐水的纱布清理干净受试部位（注意不要擦破表皮），用棉签蘸1％甲苯胺蓝染色液，均匀涂在受试部位及其周围的皮肤粘膜上染色。待染色液干燥后，再用1％醋酸脱色液擦洗被染色部位，并观察已染色的部位是否脱色。 结果： 甲苯胺蓝试验阳性表现为用脱色液后蓝色染料清除仍保留为深蓝色者。表明是尖锐湿疣或是其亚临床表现。 甲苯胺蓝试验阴性表现为用脱色液后蓝色染料被清除掉或仅呈淡蓝色者。排除尖锐湿疣或其亚临床表现。 （三）HPV巴氏涂片细胞学检查 原理：通过观察外生殖器和／或肛门等部位脱落的上皮细胞或尖锐湿疣病变组织染色后细胞形态的变化，以判断是否有尖锐湿疣亚临床表现或尖锐湿疣。 方法：取患者分泌物、采用病灶刮片或用生理盐水磨擦病灶涂片、尿道口印片，以获取脱落的上皮细胞，待自然干燥后，经染色进行细胞学检查。 操作步骤： ①固定：待涂膜自然干燥后，将涂片置乙醇乙醚固定 液中固定30分钟以上。 ②加水：将涂片依次浸入80%、70%、50%乙醇中各30秒，后置入蒸馏水中至少2分钟。 ③苏木素染色：将涂片置于苏木素染液中5～10分钟，取出后水洗。 ④分化：将涂片浸入0.5 %～1%稀盐酸数秒，洗去多余的染液，水洗去除酸。 ⑤蓝化：置于碳酸锂或稀氨水中染色1分钟，取出后水洗5分钟。 ⑥脱水：依次置于50%、70%、80%及95%乙醇中30秒至1分钟进行脱水，在95%乙醇中脱水2次。 ⑦浆染：橘黄G6中染色2分钟后，在95%乙醇中浸洗2次；再浸入EA36染液中染2 ～4分钟，用95%乙醇浸洗2次洗去多余染液。 ⑧脱水：置于无水乙醇中2分钟。 ⑨透明：置于二甲苯中2分钟。 ⑩封片镜检：用中性树胶封片，镜检。 结果：在涂片中可以见到两种细胞，一种细胞的核周围有晕环，它占据了细胞浆的大部分，而将细胞浆压缩到边缘呈浓缩状，此种细胞称为空泡化细胞，它来源于浅层的鳞状上皮细胞。另一种细胞称为角化不良细胞，可单个或成堆分布，特征为细胞深伊红染色，核小而致密浓染。 此外，有时还可见到病毒包涵体，病毒包涵体的特征为在脱落的上皮细胞核内或核旁胞浆内可见圆形、椭圆形大小不等均质浓染质块。 凹空细胞：凹空细胞主要见于表皮浅层和／或棘细胞全层。典型的凹空细胞的形态有以下特点： ①细胞体积大，核大，单核或双核；染色深，核变形或不规则，轻度异形性，核边缘不齐，呈所谓“毛毛虫”状 ②细胞核周围有空晕，为环状核周胞浆空化，少量胞浆围绕细胞核周围呈放射状细丝样贴附细胞核膜 ③细胞边缘尚存带状胞浆  ④越向表皮浅层凹空细胞之胞浆空泡化越明显，且细胞体积亦越大 ⑤凹空细胞群集存在，但无细胞间水肿。这种变化与一般细胞水肿或空泡变性不同，后者成群存在，常伴有细胞水肿，而且无核肥大变化 方法学评价： 细胞检查找到凹空细胞对诊断尖锐湿疣有重要意义。有报道涂片细胞学检查的特异性达90％，但其敏感性差，对HPV感染者只有15％-50％为阳性。尽管凹空细胞出现在有HPV生殖道感染中具有诊断意义，但有许多HPV感染的组织、特别是哪些HPV潜伏感染的组织不出现凹空细胞。 （四）HPV细胞抗原检测 包括免疫荧光和免疫组化两大类 免疫荧光法需荧光显微镜，切片结果不能长久保存，一般应用较少。 免疫组化法是主要用于检查HPV抗原(HPV衣壳抗原)的方法。该方法采用的技术包括抗生物素蛋白—生物素轭合物法(ABC法) 、过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP法)等，对HPV抗原进行免疫组化染色后观察结果。 原理：（过氧化物酶抗过氧化物酶法{PAP}法为例） HPV感染人体表皮细胞后，在细胞内增殖合成衣壳蛋白而成为HPV抗原成分。受检标本首先与抗HPV抗体（一抗）孵育，标本中的HPV抗原与抗体结合，然后再加入抗一抗的抗体（二抗）及PAP复合物，二抗一方面与一抗相连，同时也与PAP复合物相连，此时在显色剂存在的情况下，可出现显色反应，由此判断标本内是否有HPV感染。 方法： ①常规石蜡切片或冰冻切片，加3%H2O2处理，以除去内源性过氧化物酶活性，防止假阳性或背景染色深的现象。 ②切片加正常血清，以封闭不必要的抗原。 ③加抗HPV抗体，室温孵育30分钟，PBS缓冲液洗。 ④加二抗，室温孵育30分钟，PBS缓冲液洗。 ⑤加PAP试剂，室温孵育30分钟，PBS缓冲液洗。 ⑥加显色剂，氨乙基咔唑（AEC）显色5 ～15分钟，蒸馏水洗。 ⑦经苏木素染色1 ～5分钟，蒸馏水洗。 ⑧将切片置氨水中浸数次，水洗。 ⑨甘油明胶封片，普通显微镜下观察。 结果： 在光学显微镜下见到胞核内有棕黄色微细均匀颗粒为阳性细胞，即HPV抗原检查阳性。阳性细胞多位于表皮棘层中上部，多呈散在灶状分布。这些阳性细胞都是诊断性凹空细胞。  CA的免疫组化检查 方法学评价：免疫组化法检查HPV抗原阳性对诊断H